| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 黄病毒概述 | 第10-12页 |
| 1.2 坦布苏病毒概述及研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 坦布苏病毒概述 | 第12页 |
| 1.2.2 坦布苏病毒流行病学 | 第12页 |
| 1.2.3 坦布苏病毒研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 反向操作系统的概述 | 第13-15页 |
| 1.3.1 病毒反向操作系统概述 | 第13页 |
| 1.3.2 黄病毒反向遗传操作系统概述 | 第13-14页 |
| 1.3.3 黄病毒反向遗传操作系统的应用 | 第14-15页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 2 坦布苏病毒rFX2010-MM1775-EDⅢ与rMM1775-FX2010-EDⅢ的拯救 | 第16-35页 |
| 2.1 材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 配制的主要培养基、缓冲液及试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 购买的实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 rFX2010-MM1775-EDⅢ与rMM1775-FX2010-EDⅢ毒株拯救技术路线 | 第18-20页 |
| 2.3 方法 | 第20-30页 |
| 2.3.1 E基因定点突变质粒的引物设计 | 第20页 |
| 2.3.2 FX2010-E/V312A/T332S和MM1775-E/A312V/S332T的构建 | 第20-21页 |
| 2.3.3 目的片段磷酸化 | 第21-22页 |
| 2.3.4 目的片段与载体连接 | 第22页 |
| 2.3.5 重组质粒转入宿主细胞 | 第22-23页 |
| 2.3.6 阳性质粒的抽提 | 第23页 |
| 2.3.7 重组病毒全长cDNA的扩增 | 第23-25页 |
| 2.3.8 重组病毒基因组cDNA的体外转录 | 第25-26页 |
| 2.3.9 转染 | 第26页 |
| 2.3.10 重组病毒致DF-1细胞病变 | 第26页 |
| 2.3.11 重组病毒间接免疫荧光检测(IFA) | 第26-27页 |
| 2.3.12 拯救毒株的全基因组分段扩增及测序 | 第27-30页 |
| 2.4 结果 | 第30-33页 |
| 2.4.1 FX2010-E/V312A/T332S和MM1775-E/A312V/S332T质粒构建结果 | 第30页 |
| 2.4.2 FX2010-E/V312A/T332S和MM1775-E/A312V/S332T阳性质粒测序结果 | 第30-31页 |
| 2.4.3 rFX2010-MM1775-EDⅢ与rMM1775-FX2010-EDⅢ全长cDA扩增结果 | 第31页 |
| 2.4.4 rFX2010-MM1775-EDⅢ与rMM1775-FX2010-EDⅢ毒株的救获 | 第31-32页 |
| 2.4.5 rFX2010-MM1775-EDⅢ与rMM1775-FX2010-EDⅢ基因组分片段扩增结果 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-35页 |
| 3 RFX2010-MM1775-EDⅢ和RMM1775-FX2010-EDⅢ重组毒的感染性影响 | 第35-40页 |
| 3.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.1 病毒、细胞和实验动物 | 第35页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 病毒扩增 | 第35页 |
| 3.2.2 病毒滴度测定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 组织样品、血清样品的采集和处理 | 第36页 |
| 3.3 病毒对鸭子的感染性试验 | 第36-37页 |
| 3.4 同群接触感染试验 | 第37页 |
| 3.5 结果 | 第37-38页 |
| 3.5.1 病毒滴定结果 | 第37页 |
| 3.5.2 注射接种鸭脏器病毒分离结果 | 第37-38页 |
| 3.5.3 接触感染鸭血清抗体检测结果 | 第38页 |
| 3.6 讨论 | 第38-40页 |
| 4 结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 作者简介 | 第45页 |
