| 中英文缩略词表 | 第9-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 前言 | 第17-23页 |
| 材料与方法 | 第23-56页 |
| 1. 实验材料 | 第23-34页 |
| 1.1 菌种、质粒和细胞株 | 第23-25页 |
| 1.2 实验动物 | 第25-26页 |
| 1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.4 其他试剂 | 第27-28页 |
| 1.5 引物的合成与设计 | 第28-29页 |
| 1.6 小干扰RNA (siRNA)的合成 | 第29页 |
| 1.7 主要仪器设备 | 第29-31页 |
| 1.8 生物学软件: | 第31页 |
| 1.9 常用试剂的配制 | 第31-34页 |
| 2. 实验方法 | 第34-56页 |
| 2.1 对细胞的处理 | 第34-35页 |
| 2.2 细胞瞬时转染 | 第35-36页 |
| 2.3 RNAi慢病毒载体构建和包装(本部分由吉凯基因完成) | 第36-37页 |
| 2.4 稳定细胞系的筛选 | 第37-38页 |
| 2.5 细胞增殖实验 | 第38页 |
| 2.6 细胞克隆形成实验 | 第38页 |
| 2.7 细胞周期检测 | 第38页 |
| 2.8 细胞侵袭迁移实验(Transwell assay) | 第38-40页 |
| 2.9 细胞总RNA和总蛋白的提取 | 第40页 |
| 2.10 胞核-胞浆-胞膜蛋白制备 | 第40-42页 |
| 2.11 蛋白和RNA浓度测定 | 第42-43页 |
| 2.12 逆转录(Reverse Transcription,RT)与PCR扩增 | 第43-44页 |
| 2.13 银染 | 第44页 |
| 2.14 Western Blot | 第44-46页 |
| 2.15 GST蛋白表达和纯化 | 第46-47页 |
| 2.16 体外蛋白质结合分析(GST-pulldown) | 第47-48页 |
| 2.17 感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 2.18 细菌的转化 | 第48页 |
| 2.19 质粒提取及鉴定 | 第48-50页 |
| 2.20 免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)试验 | 第50页 |
| 2.21 免疫荧光(Immunofluoresence,IF) | 第50-51页 |
| 2.22 裸鼠移植瘤实验 | 第51页 |
| 2.23 免疫组织化学实验 | 第51-52页 |
| 2.24 ELISA实验 | 第52-53页 |
| 2.25 转基因小鼠实验 | 第53-55页 |
| 2.26 4-NQO处理小鼠 | 第55页 |
| 2.27 小鼠18F-FDG-PET实验(此部分在武汉同济医学院协和医院PET中心完成) | 第55页 |
| 2.28 统计分析 | 第55-56页 |
| 实验结果 | 第56-112页 |
| 1. FAM135B的生物信息学信息 | 第56-62页 |
| 1.1 FAM135B基因的序列信息 | 第56页 |
| 1.2 FAM135B的转录本 | 第56-57页 |
| 1.3 FAM135B在正常组织中mRNA表达水平 | 第57-58页 |
| 1.4 FAM135B的蛋白序列信息 | 第58页 |
| 1.5 FAM135B的保守性 | 第58-59页 |
| 1.6 FAM135B在食管癌中有突变、扩增和缺失 | 第59-60页 |
| 1.7 FAM135B在其他癌种中的变异情况 | 第60-61页 |
| 1.8 GEPIA数据库中FAM135B与生存预后的关系 | 第61-62页 |
| 2. FAM135B在食管鳞癌组织中高表达且与预后相关 | 第62-69页 |
| 2.1 FAM135B在食管鳞癌组织中高表达 | 第62-65页 |
| 2.2 FAM135B在ESCC胞浆中的表达量是患者生存预后因素之一 | 第65-67页 |
| 2.3 FAM135B不是食管鳞癌患者的独立预后因素 | 第67-68页 |
| 2.4 FAM135B表达量和其他临床指标的关系 | 第68-69页 |
| 3. 生物学功能研究 | 第69-77页 |
| 3.1 FAM135B蛋白在食管鳞癌细胞系中表达量高于正常对照 | 第69-70页 |
| 3.2 FAM135B在食管癌细胞系中G2/M表达量更高 | 第70-72页 |
| 3.3 FAM135B促进食管癌细胞系增殖、克隆形成、侵袭和迁移 | 第72-73页 |
| 3.4 FAM135B促进食管癌细胞系周期进展、抑制细胞凋亡 | 第73-75页 |
| 3.5 FAM135B促进食管癌细胞体内成瘤能力 | 第75-77页 |
| 4. 作用机制研究 | 第77-92页 |
| 4.1 FAM135B和GRN之间有直接相互作用 | 第77-81页 |
| 4.2 FAM135B促进GRN向胞外分泌 | 第81-84页 |
| 4.3 GRN促进食管鳞癌增殖和凋亡抵抗 | 第84-86页 |
| 4.4 GRN通过活化PI3K-AKT-mTOR通路促进食管鳞癌增殖 | 第86-89页 |
| 4.5 FAM135B和GRN形成正反馈相互促进 | 第89-91页 |
| 4.6 FAM135B通过GRN起到促进食管癌细胞系增殖的作用 | 第91-92页 |
| 5. GRN在食管鳞癌组织中高表达 | 第92-97页 |
| 5.1 GRN在食管鳞癌组织的临床信息 | 第92-93页 |
| 5.2 同时高表达FAM135B和GRN的患者预后显著变差 | 第93-96页 |
| 5.3 FAM135B和GRN共同高表达是食管鳞癌患者的独立预后因素 | 第96-97页 |
| 6. FAM135B转基因小鼠模型 | 第97-112页 |
| 6.1 FAM135B转基因小鼠模型构建与基因型鉴定 | 第97-99页 |
| 6.2 FAM135B转基因小鼠中各器官蛋白表达水平检测 | 第99-100页 |
| 6.3 FAM135B转基因小鼠食管癌诱导模型构建 | 第100-101页 |
| 6.4 FAM135B转基因小鼠更容易被诱导生成食管癌 | 第101-104页 |
| 6.5 FAM135B转基因小鼠食管和肿瘤表达特征 | 第104-105页 |
| 6.6 FAM135B转基因小鼠经诱导后生存期更短 | 第105-106页 |
| 6.7 FAM135B转基因小鼠血清中GRN溶度更高 | 第106-107页 |
| 6.8 FAM135B转基因小鼠更容易自发形成肿瘤 | 第107-112页 |
| 讨论 | 第112-126页 |
| 1. AM135B的基因变异 | 第113-114页 |
| 2. FAM135B促进GRN分泌的机制 | 第114-117页 |
| 3. GRN的受体 | 第117-120页 |
| 4. FAM135B的其他可能作用机制 | 第120-124页 |
| 5. 食管癌小鼠模型 | 第124页 |
| 6. 展望 | 第124-126页 |
| 结论 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-137页 |
| 在读期间已发表及待发表文章 | 第137-138页 |
| GRN在恶性肿瘤中的功能和作用机制研究进展 | 第138-148页 |
| 参考文献 | 第142-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 基金资助 | 第149-150页 |
