| 论文创新点 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-43页 |
| 1.1 人巨细胞病毒概述 | 第13-15页 |
| 1.2 HCMV感染复制周期及基因表达调控 | 第15-18页 |
| 1.3 单纯疱疹病毒1型概述 | 第18-19页 |
| 1.4 人巨细胞病毒潜伏感染与裂解复制 | 第19-23页 |
| 1.5 HCMV核衣壳的组装 | 第23-26页 |
| 1.6 SUMO化简介及与疱疹病毒之间的关系 | 第26-30页 |
| 1.7 人巨细胞病毒的免疫逃逸 | 第30-34页 |
| 1.7.1 HCMV调节非特异性免疫 | 第30-33页 |
| 1.7.2 HCMV调节特异性免疫 | 第33-34页 |
| 1.8 HCMV相关疾病和预防治疗 | 第34-36页 |
| 1.9 EGS技术简介 | 第36-38页 |
| 1.10 人巨细胞病毒基因组突变技术 | 第38-43页 |
| 第二章 材料与方法 | 第43-60页 |
| 2.1 实验试剂与材料 | 第43页 |
| 2.2 实验仪器与设备 | 第43-44页 |
| 2.3 常规分子生物学实验技术 | 第44-48页 |
| 2.3.1 化学感受态细胞的制备与使用 | 第44-46页 |
| 2.3.2 碱裂解法提取质粒 | 第46-47页 |
| 2.3.3 常规克隆与表达载体构建 | 第47页 |
| 2.3.4 点突变克隆构建 | 第47-48页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR技术 | 第48页 |
| 2.4 酵母双杂交实验 | 第48-50页 |
| 2.4.1 试剂准备 | 第48-49页 |
| 2.4.2 酵母转化(TRAFO法) | 第49页 |
| 2.4.3 酵母四缺筛选 | 第49-50页 |
| 2.4.4 X-gal显色实验 | 第50页 |
| 2.5 细胞学实验 | 第50-52页 |
| 2.5.1 细胞传代培养(以293T细胞为例) | 第50-51页 |
| 2.5.2 磷酸钙转染法 | 第51页 |
| 2.5.3 脂质体转染法 | 第51-52页 |
| 2.6 蛋白质相关实验 | 第52-56页 |
| 2.6.1 PAGE电泳和Western blot检测 | 第52-54页 |
| 2.6.2 免疫共沉淀 | 第54-55页 |
| 2.6.3 间接免疫荧光 | 第55页 |
| 2.6.4 双荧光启动子 | 第55-56页 |
| 2.6.5 细胞基因组DNA提取 | 第56页 |
| 2.7 病毒相关实验 | 第56-60页 |
| 2.7.1 病毒感染及扩增 | 第56页 |
| 2.7.2 病毒滴定 | 第56-57页 |
| 2.7.3 HCMV BAC突变病毒 | 第57-60页 |
| 第三章 HCMV病毒组装蛋白前体UL80.5与SUMO化E2连接酶UBC9相互作用研究 | 第60-80页 |
| 3.1 概述 | 第60-61页 |
| 3.2 实验结果 | 第61-77页 |
| 3.2.1 本章实验所用质粒 | 第61-63页 |
| 3.2.2 UL80.5蛋白与E2连接酶UBC9相互作用且共定位 | 第63-65页 |
| 3.2.3 UBC9主要通过β4-β6区域与UL80.5蛋白相互作用 | 第65-67页 |
| 3.2.4 UL80.5蛋白在真核细胞内可被SUMO化修饰 | 第67-69页 |
| 3.2.5 UL80.5蛋白的SUMOylation位点为371位赖氨酸 | 第69-71页 |
| 3.2.6 UL80.5蛋白SUMO化修饰对其结合UL86蛋白的影响 | 第71-74页 |
| 3.2.7 UL80.5蛋白的SUMO化对UL86蛋白入核的影响 | 第74-75页 |
| 3.2.8 UL80.5蛋白的SUMO化对病毒增殖的影响 | 第75-77页 |
| 3.3 讨论与展望 | 第77-80页 |
| 第四章 HCMV病毒裂解复制起始相关蛋白UL84与宿主转录辅助因子FHL2相互作用研究 | 第80-92页 |
| 4.1 概述 | 第80-82页 |
| 4.2 实验结果 | 第82-89页 |
| 4.2.1 本章实验所使用质粒 | 第82-83页 |
| 4.2.2 UL84蛋白与FHL2蛋白相互作用 | 第83-84页 |
| 4.2.3 UL84蛋白与FHL2蛋白在U373细胞核中共定位 | 第84-85页 |
| 4.2.4 UL84蛋白与FHL2相互作用的结构域 | 第85-87页 |
| 4.2.5 UL84蛋白和FHL2蛋白对IFNβ转录活性的影响 | 第87-89页 |
| 4.3 讨论与展望 | 第89-90页 |
| 4.4 后续实验设计 | 第90-92页 |
| 4.4.1 双荧光实验检测缺失结合区域后的UL84蛋白与FHL2转录调控拮抗作用 | 第90页 |
| 4.4.2 检测UL84与IE2蛋白与IFNβ的promoter区域结合ChIP实验 | 第90-91页 |
| 4.4.3 病毒感染情况下FHL2和UL84蛋白表达变化与IFNβ启动子活性变化 | 第91-92页 |
| 第五章 基因工程改造的EGS可以有效抑制HSV-1病毒基因表达和病毒增殖 | 第92-103页 |
| 5.1 概述 | 第92-94页 |
| 5.2 实验结果 | 第94-100页 |
| 5.2.1 体外EGS介导的ICP4基因mRNA序列核酶P切割 | 第94-96页 |
| 5.2.2 细胞中EGS的稳定表达 | 第96页 |
| 5.2.3 EGS介导的HSV-1病毒ICP4基因表达抑制 | 第96-97页 |
| 5.2.4 EGS介导的HSV-1病毒基因表达 | 第97-98页 |
| 5.2.5 EGS介导的HSV-1病毒增殖抑制 | 第98-100页 |
| 5.3 讨论与展望 | 第100-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 博士期间已发表和正在撰写的论文 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
