| 中文摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 1 前言 | 第19-41页 |
| 1.1 鸭病毒性肝炎概述 | 第19-20页 |
| 1.1.1 鸭病毒性肝炎的发病史 | 第19页 |
| 1.1.2 DHAV-1 的病毒学分类 | 第19-20页 |
| 1.2 DHAV-1 的形态学结构和理化特性 | 第20-21页 |
| 1.2.1 形态学结构 | 第20页 |
| 1.2.2 理化特性 | 第20-21页 |
| 1.2.3 DHAV-1 的病原学特性 | 第21页 |
| 1.3 DHAV-1 流行病学 | 第21-23页 |
| 1.3.1 DHAV-1 的流行病学特点 | 第21-22页 |
| 1.3.2 病毒的分离与培养 | 第22-23页 |
| 1.4 DHAV-1 的分子生物学特性 | 第23-27页 |
| 1.4.1 病毒基因组特性 | 第23-26页 |
| 1.4.2 DHAV-1 感染机制 | 第26-27页 |
| 1.5 鸭病毒性肝炎的诊断方法 | 第27-32页 |
| 1.5.1 临床诊断 | 第27-28页 |
| 1.5.2 根据病理剖检变化诊断 | 第28页 |
| 1.5.3 血清学检测 | 第28-29页 |
| 1.5.4 分子生物学诊断 | 第29-32页 |
| 1.6 DHAV-1 的预防与治疗 | 第32-33页 |
| 1.6.1 DHAV-1 的预防 | 第32页 |
| 1.6.2 治疗 | 第32-33页 |
| 1.7 小RNA病毒科 3’UTR的结构和功能 | 第33-36页 |
| 1.7.1 3’UTR的结构特征 | 第33-35页 |
| 1.7.2 小RNA病毒 3’UTR的功能 | 第35-36页 |
| 1.8 感染性克隆研究进展 | 第36-40页 |
| 1.8.1 感染性克隆研究进展 | 第36-39页 |
| 1.8.2 感染性克隆的应用 | 第39-40页 |
| 1.9 本研究的目的及意义 | 第40-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-72页 |
| 2.1 材料 | 第41-42页 |
| 2.1.1 菌（毒）株 | 第41页 |
| 2.1.2 实验动物及细胞株 | 第41页 |
| 2.1.3 酶和相关试剂 | 第41页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第41页 |
| 2.1.5 试剂 | 第41-42页 |
| 2.2 DNA-Launched感染性克隆的构建 | 第42-57页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第42-44页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增 | 第44-45页 |
| 2.2.3 pEGFP-N2载体的改造 | 第45-47页 |
| 2.2.4 感染性克隆的构建 | 第47-51页 |
| 2.2.5 序列分析 | 第51页 |
| 2.2.6 DHAV-1 LY0801株DNA-Launched感染性克隆拯救病毒粒子 | 第51-53页 |
| 2.2.7 拯救病毒粒子的鉴定 | 第53-57页 |
| 2.3 拯救病毒粒子部分生物学活性研究 | 第57-63页 |
| 2.3.1 TCID50的测定 | 第57页 |
| 2.3.2 ELD50的测定 | 第57-58页 |
| 2.3.3 LD50的测定 | 第58页 |
| 2.3.4 生长曲线的绘制 | 第58-59页 |
| 2.3.5 毒力水平试验 | 第59页 |
| 2.3.6 组织嗜性试验 | 第59-60页 |
| 2.3.7 雏鸭死亡组织病理切片观察 | 第60-63页 |
| 2.4 Poly(A)长度对病毒增殖和毒力的影响 | 第63-68页 |
| 2.4.1 试验思路 | 第63-64页 |
| 2.4.2 带有不同长度poly(A)尾的DNA-Launched感染性克隆的构建 | 第64-67页 |
| 2.4.3 比对不同长度poly(A)尾的拯救病毒粒子生长特性 | 第67-68页 |
| 2.5 无POLY(A)的拯救病毒增殖和毒力研究 | 第68-72页 |
| 2.5.1 获得poly(A)0拯救病毒粒子 | 第68-69页 |
| 2.5.2 拯救病毒粒子的鉴定 | 第69页 |
| 2.5.3 BHK-21 细胞连续传代 | 第69页 |
| 2.5.4 健康鸭胚连续传代 | 第69页 |
| 2.5.5 qRT-PCR | 第69页 |
| 2.5.6 poly(A)长度的测定 | 第69-72页 |
| 3 结果 | 第72-98页 |
| 3.1 DNA-Launched感染性克隆构建结果 | 第72-76页 |
| 3.1.1 感染性克隆构建结果 | 第72页 |
| 3.1.2 序列分析结果 | 第72-73页 |
| 3.1.3 拯救病毒粒子鉴定结果 | 第73-75页 |
| 3.1.4 拯救病毒效率的比较 | 第75-76页 |
| 3.2 拯救病毒粒子部分生物学活性分析 | 第76-86页 |
| 3.2.1 TCID50测定结果 | 第76-79页 |
| 3.2.2 ELD50测定结果 | 第79页 |
| 3.2.3 LD50的测定结果 | 第79-80页 |
| 3.2.4 生长动力曲线的绘制结果 | 第80-81页 |
| 3.2.5 雏鸭毒力试验结果 | 第81-82页 |
| 3.2.6 组织嗜性试验结果 | 第82-84页 |
| 3.2.7 组织切片结果 | 第84-86页 |
| 3.3 Poly(A) 长度对病毒增殖和毒力的影响 | 第86-93页 |
| 3.3.1IFA结果 | 第86-88页 |
| 3.3.2 RNA纯度鉴定结果 | 第88页 |
| 3.3.3 拯救病毒粒子在细胞上清中的增殖特点 | 第88-89页 |
| 3.3.4 拯救病毒粒子在BHK-21 细胞中的增殖特点 | 第89-91页 |
| 3.3.5 细胞内容物的增殖特点 | 第91-93页 |
| 3.4 无poly(A)的拯救病毒增殖和毒力研究结果 | 第93-98页 |
| 3.4.1 拯救病毒粒子鉴定结果 | 第93-95页 |
| 3.4.2 qRT-PCR结果 | 第95-97页 |
| 3.4.3 poly(A)长度测定结果 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-105页 |
| 4.1 DNA-Launched感染性克隆构建 | 第98-99页 |
| 4.2 拯救病毒部分生物学活性分析 | 第99-100页 |
| 4.3 Poly(A)长度对病毒增殖和毒力的影响 | 第100-102页 |
| 4.4 无poly(A)的拯救病毒增殖和毒力研究 | 第102-105页 |
| 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第116页 |
