| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| ·雌激素及其代谢产物在乳腺癌中的作用 | 第9-11页 |
| ·雌激素 | 第9页 |
| ·雌二醇与乳腺癌的关系 | 第9-10页 |
| ·CYP1A1、CYP1B1介导的雌二醇代谢及其与乳腺癌的关系 | 第10-11页 |
| ·组蛋白甲基化与组蛋白甲基化酶SMYD3 | 第11-14页 |
| ·表观遗传及组蛋白甲基化概述 | 第11页 |
| ·SMYD3的基本特征 | 第11-12页 |
| ·SMYD3的转录调节作用机制 | 第12-13页 |
| ·SMYD3在乳腺癌中的作用 | 第13-14页 |
| ·miR-200c与乳腺癌的关系 | 第14-15页 |
| ·microRNAs的机制概述 | 第14-15页 |
| ·miR-200家族概述及其与乳腺癌的关系 | 第15页 |
| ·本课题的主要内容、研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-46页 |
| ·实验材料 | 第17-26页 |
| ·材料与试剂 | 第17-19页 |
| ·常用溶液及培养基配制方法 | 第19-25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-46页 |
| ·细胞培养 | 第26-27页 |
| ·细胞转染 | 第27-28页 |
| ·逆转录PCR(RT-PCR)及实时荧光定量PCR(Real time PCR) | 第28-33页 |
| ·蛋白质免疫印记(Western blot) | 第33-34页 |
| ·荧光素酶活性检测(Luciferase reporter assay) | 第34-35页 |
| ·染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第35-37页 |
| ·免疫荧光技术及免疫组织化学 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·CYP1B1 YUTR荧光素酶报告质粒构建 | 第38-43页 |
| ·点突变质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·雌激素及其代谢产物的高效液相色谱分析(HPLC) | 第45页 |
| ·统计分析方法 | 第45-46页 |
| 3 结果与讨论 | 第46-66页 |
| ·E_2及SMYD3对雌激素代谢酶的转录调控作用分析 | 第46-49页 |
| ·E_2对乳腺癌细胞中CYP1A1、CYP1B1和COMT的转录调控作用分析 | 第46页 |
| ·SMYD3对CYP1A1、CYP1B1和COMT的转录调控作用分析 | 第46-49页 |
| ·乳腺癌细胞及临床组织样本中的表达相关性分析 | 第49-50页 |
| ·SMYD3与CYP1A1、CYP1B1在乳腺细胞中及相关性分析 | 第49页 |
| ·临床乳腺癌组织样本中的表达水平及相关性分析 | 第49-50页 |
| ·SMYD3对雌激素代谢影响情况的HPLC分析 | 第50-52页 |
| ·SMYD3对MCF-7细胞外E_2代谢消耗的影响情况分析 | 第50-51页 |
| ·SMYD3对MCF-7细胞内2-OHE_2和4-OHE_2生成量的影响情况分析 | 第51-52页 |
| ·SMYD3对CYP1A1、CYP1B1转录调控作用机制分析 | 第52-59页 |
| ·SMYD3对CYP1A1、CYP1B1启动子转录调控作用分析 | 第52-57页 |
| ·组蛋白甲基化在SMYD3对CYP1A1、CYP1B1的转录调控中的作用 | 第57-59页 |
| ·miR-200c在SMYD3抑制CYP1B1转录中的作用分析 | 第59-64页 |
| ·miR-200c对CYP1B1的3'UTR转录调控作用分析 | 第59-63页 |
| ·miR-200c对CYP1B1 mRNA及蛋白质水平的影响情况分析 | 第63-64页 |
| ·E_2对miR-200c转录调控作用分析 | 第64页 |
| ·SMYD3对雌激素代谢酶CYP1A1、CYP1B1转录调节机制小结 | 第64-66页 |
| 4 结论 | 第66-67页 |
| 5 展望 | 第67-68页 |
| 6 参考文献 | 第68-75页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第75-76页 |
| 8 致谢 | 第76页 |
