| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号及缩略语 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一章 猪链球菌的研究概述 | 第13-25页 |
| 1 猪链球菌简介 | 第13-25页 |
| ·猪链球菌的历史概况 | 第13-14页 |
| ·猪链球菌病原学 | 第14-15页 |
| ·分类 | 第14页 |
| ·形态及染色特性 | 第14页 |
| ·培养特性 | 第14-15页 |
| ·抗抗力 | 第15页 |
| ·耐药性 | 第15页 |
| ·猪链球菌流行病学研究 | 第15-16页 |
| ·猪链球菌毒力因子研究 | 第16-21页 |
| ·荚膜多糖(CPS) | 第16-17页 |
| ·溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外蛋白因子(EF) | 第17-18页 |
| ·溶血素(SLY) | 第18页 |
| ·谷氨酸脱氢酶(GDH) | 第18-19页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) | 第19页 |
| ·纤连蛋白和纤连蛋白原结合蛋白(FBPS) | 第19页 |
| ·毒力相关序列(orf2) | 第19-20页 |
| ·89k毒力岛 | 第20页 |
| ·其他毒力因子 | 第20-21页 |
| ·致病机制 | 第21-22页 |
| ·猪链球菌的检测方法及研究进展 | 第22-24页 |
| ·经典鉴定方法 | 第22页 |
| ·分子生物学方法 | 第22-24页 |
| ·本试验研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二篇 试验部分 | 第25-59页 |
| 第二章 猪链球菌2型主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第25-43页 |
| 摘要 | 第25-26页 |
| 1 试验材料 | 第26-32页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要设备 | 第27页 |
| ·种系背景明确的试验对照菌株 | 第27页 |
| ·引物及探针 | 第27页 |
| ·相关主要试剂的制备 | 第27-28页 |
| ·猪链球菌2型细菌基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·三重实时荧光定量PCR阳性标准品的制备 | 第29-32页 |
| ·目的片段的PCR扩增及电泳成像 | 第29页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第29-30页 |
| ·胶回收产物连接 | 第30页 |
| ·连接产物转化 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的PCR筛选及测序验证 | 第31页 |
| ·重组质粒阳性模板标准的制备 | 第31页 |
| ·重组质粒浓度的测定及计算 | 第31-32页 |
| 2 三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第32-33页 |
| ·三重荧光定量PCR反应条件的优化 | 第32页 |
| ·三重荧光定量PCR扩增曲线及标准曲线的建立 | 第32页 |
| ·敏感性试验 | 第32页 |
| ·特异性试验 | 第32页 |
| ·重复性试验 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-40页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第33页 |
| ·重组质粒的制备和浓度测定 | 第33页 |
| ·Taqman法单项实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第33-35页 |
| ·Taqman法三重实时荧光定量PCR检测方法及标准曲线的建立 | 第35-37页 |
| ·反应体系和反应条件 | 第35-36页 |
| ·Taqman三重实时荧光定量PCR标准曲线 | 第36-37页 |
| ·敏感性试验 | 第37-39页 |
| ·普通PCR检测猪链球菌2型敏感性试验 | 第37-38页 |
| ·三重荧光定量PCR检测猪链球菌2型敏感性试验 | 第38-39页 |
| ·三重荧光定量PCR检测猪链球菌2型的特异性 | 第39-40页 |
| ·三重荧光定量PCR的重复性试验 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 猪链球菌选择性增菌液的研究 | 第43-51页 |
| 摘要 | 第43页 |
| 1 材料和方法 | 第43-44页 |
| ·菌株 | 第43-44页 |
| ·受试菌株 | 第43页 |
| ·其他菌株 | 第43-44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·抗生素药敏纸片 | 第44页 |
| ·抗生素添加剂 | 第44页 |
| ·麦氏比浊管 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-46页 |
| ·抗菌药物敏感试验 | 第44-45页 |
| ·抗菌药物最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第45页 |
| ·抗菌药物对其他菌的抑制情况 | 第45-46页 |
| ·组合抗菌药物添加培养基的效果 | 第46页 |
| ·模拟污染样本分离猪链球菌情况的初步比较 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-50页 |
| ·猪链球菌2型对部分抗菌药物的敏感性 | 第46页 |
| ·抗菌药物最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第46-47页 |
| ·抗菌药物对其他菌的抑制情况 | 第47-48页 |
| ·组合抗菌药物添加培养基的效果 | 第48-49页 |
| ·模拟污染样本分离猪链球菌情况的初步比较 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 上海部分地区临床表观健康猪群猪链球菌携带情况的检测 | 第51-59页 |
| 摘要 | 第51页 |
| 1 材料和方法 | 第51-52页 |
| ·参考菌株及培养条件 | 第51-52页 |
| ·所用试剂,仪器和设备 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·仪器设备 | 第52页 |
| ·引物合成 | 第52页 |
| 2 样品处理 | 第52-54页 |
| ·样品的采集 | 第52-53页 |
| ·样品的均质、增菌和分离 | 第53页 |
| ·模板的制备 | 第53页 |
| ·常规方法初步鉴定 | 第53页 |
| ·猪链球菌菌株型鉴定 | 第53页 |
| ·猪链球菌2型毒力因子检测 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-56页 |
| ·猪链球菌形态学观察 | 第54页 |
| ·猪链球菌革兰氏染色观察 | 第54-55页 |
| ·淋巴结样品中猪链球菌分布情况 | 第55-56页 |
| ·GDH阳性的猪链球菌2型毒力因子检测结果 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
