| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 英文缩略表 | 第14-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-23页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·研究背景 | 第16-21页 |
| ·鹿茸的发生 | 第16-17页 |
| ·鹿茸的再生 | 第17页 |
| ·鹿茸发生干细胞细胞与鹿茸再生干细胞 | 第17-18页 |
| ·p21 基因的生物学特性 | 第18-19页 |
| ·细胞周期、p21 蛋白与器官再生 | 第19-21页 |
| ·研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| 第2章 针对东北梅花鹿 p21 基因的重组慢病毒载体的构建与鉴定 | 第23-41页 |
| ·实验材料 | 第23-28页 |
| ·慢病毒系统 | 第23-26页 |
| ·实验试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试剂配制 | 第27-28页 |
| ·实验主要仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-35页 |
| ·东北梅花鹿 p21 基因 RNAi 高分靶位点序列的筛选 | 第28-31页 |
| ·shRNA 寡核苷酸链的设计 | 第31页 |
| ·shRNA 退火 | 第31页 |
| ·感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| ·载体质粒的扩增 | 第32-33页 |
| ·载体质粒的酶切 | 第33页 |
| ·载体质粒的 DNA 片段胶回收 | 第33-34页 |
| ·重组载体的构建、转化与小量提取 | 第34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-38页 |
| ·shRNA 退火结果 | 第35-36页 |
| ·载体质粒的酶切结果 | 第36-37页 |
| ·载体质粒阳性克隆的 PCR 鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第3章 低表达 p21 基因细胞系的构建 | 第41-53页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·主要试剂配制 | 第41-42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·慢病毒三质粒的无内毒素大量提取 | 第42-43页 |
| ·重组慢病毒的包装 | 第43-44页 |
| ·病毒的收集与浓缩 | 第44页 |
| ·PP 细胞的慢病毒感染与细胞分选 | 第44-45页 |
| ·转染细胞总 RNA 的提取 | 第45页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第45-47页 |
| ·实验结果 | 第47-51页 |
| ·慢病毒包装结果 | 第47页 |
| ·慢病毒颗粒感染细胞结果 | 第47-49页 |
| ·RT-PCR 检测干扰效率结果 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第4章 RNAi 靶向抑制 p21 基因表达对 PP 细胞的生物学影响 | 第53-66页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·实验试剂 | 第53页 |
| ·主要试剂配制 | 第53-54页 |
| ·实验仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期 | 第54页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖能力 | 第54-55页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第55页 |
| ·β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老 | 第55页 |
| ·彗星实验检测 DNA 损伤 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-63页 |
| ·干扰 P21 基因对 PP 细胞周期的影响 | 第56-57页 |
| ·干扰 p21 基因对 PP 细胞增殖的影响 | 第57-58页 |
| ·干扰 p21 基因对 PP 细胞凋亡的影响 | 第58-59页 |
| ·干扰 P21 基因对 PP 细胞衰老的影响 | 第59-61页 |
| ·干扰 P21 基因对 PP 细胞 DNA 损伤的影响 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 第5章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
