| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| ·研究背景 | 第11-12页 |
| ·EHEC疫苗的研究进展 | 第12-14页 |
| ·反向疫苗学 | 第14-15页 |
| ·研究目的与意义 | 第15-17页 |
| 第一章 EHEC 0157：H7保护性抗原的筛选 | 第17-32页 |
| ·方法 | 第17-18页 |
| ·基因组序列和氨基酸序列查找 | 第17页 |
| ·ORF的预测和差异分析 | 第17-18页 |
| ·亚细胞定位 | 第18页 |
| ·结果 | 第18-30页 |
| ·大肠杆菌MG1655、EDL933、Sakai、EC4115、TW14359和Xuzhou21六株的基因及其编码序列 | 第18页 |
| ·ORF的预测和差异分析 | 第18-20页 |
| ·抗原的筛选 | 第20-26页 |
| ·亚细胞定位 | 第26-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 抗原基因的克隆、表达与纯化 | 第32-48页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·载体与菌株 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·目的基因的扩增 | 第33-35页 |
| ·目的基因的克隆、转化和酶切鉴定 | 第35页 |
| ·重组表达质粒pET22b(+)-espA和pET22b(+)-espB的构建、转化与鉴定 | 第35页 |
| ·重组表达型基因工程菌的构建 | 第35页 |
| ·重组基因工程菌的诱导表达及检测 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的大量表达、亲和层析纯化 | 第36页 |
| ·Western Blotting鉴定重组蛋白 | 第36页 |
| ·目的蛋白多抗血清的制备 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-45页 |
| ·PCR目的基因的扩增和克隆 | 第37-42页 |
| ·重组表达质粒pET22b(+)-目的基因的构建、转化与鉴定 | 第42页 |
| ·基因重组菌的诱导表达及融合蛋白的鉴定 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·目标基因的扩增 | 第45-46页 |
| ·工程菌蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| ·大肠杆菌表达条件的优化 | 第46页 |
| ·重组融合蛋白纯化条件的优化 | 第46-48页 |
| 第三章 抗原蛋白在小鼠体内免疫保护性的初步检测 | 第48-57页 |
| ·试验材料 | 第48页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·试验动物 | 第48页 |
| ·试验方法 | 第48-50页 |
| ·目的蛋白的免疫原性分析 | 第48-49页 |
| ·免疫小鼠的攻毒保护试验 | 第49页 |
| ·小鼠的高剂量攻毒 | 第49页 |
| ·ELISA分析蛋白免疫小鼠血清中抗体亚型 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-55页 |
| ·目的蛋白的免疫原性分析 | 第50-51页 |
| ·10MLD攻毒后小鼠的观察 | 第51-53页 |
| ·50MLD和100MLD攻毒后小鼠的观察 | 第53-54页 |
| ·Paa免疫组小鼠血清抗体亚型的测定 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 新型蛋白Paa、Z0390、Z4191及Z1211在功能上的探索研究 | 第57-63页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·菌株,质粒及培养基 | 第57页 |
| ·生化与分子生物写试剂 | 第57-58页 |
| ·其他耗材及仪器 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-59页 |
| ·Paa、Z0390以及Z4191小鼠血清抗EHEC 0157：H7黏附Hep-2细胞检测 | 第58页 |
| ·Paa免疫组受试动物的排菌量监测 | 第58-59页 |
| ·Z0390以及Z1211自转运功能的验证 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-61页 |
| ·Paa、Z0390及Z4191细胞水平的黏附测定 | 第59-60页 |
| ·Paa小鼠攻毒后的排菌量监测 | 第60-61页 |
| ·Z0390和Z1211自转运功能的验证 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 全文总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 英文缩略词表 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简介 | 第72-73页 |
