| 致谢 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第10页 |
| 2 流行病学 | 第10-11页 |
| 3 病原学 | 第11-14页 |
| ·PRRSV 病原学特性 | 第11-12页 |
| ·PRRSV 基因组结构 | 第12页 |
| ·病毒基因组所编码的蛋白 | 第12-14页 |
| 4 PRRSV 的致病机理 | 第14页 |
| 5 猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展 | 第14-17页 |
| 试验一 华南地区 PRRSV NSP2 与 ORF5 基因的遗传变异分析 | 第17-28页 |
| 摘要 | 第17页 |
| 1 材料与方法 | 第17-19页 |
| ·细胞 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17-18页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·血清 | 第18页 |
| ·病毒总 RNA 的提取 | 第18页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第18-19页 |
| ·测序与分析 | 第19页 |
| 2 结果与分析 | 第19-26页 |
| ·RT-PCR 检测 PRRSV | 第19-21页 |
| ·序列测定及同源性分析 | 第21-26页 |
| ·NSP2 基因核苷酸序列分析 | 第21-23页 |
| ·ORF5 基因核苷酸序列分析 | 第23-25页 |
| ·ORF5 基因推导的氨基酸序列比对 | 第25-26页 |
| 3 小结与讨论 | 第26-28页 |
| 试验二 猪蓝耳病病毒 XF 株的分离纯化及基因组测序分析 | 第28-37页 |
| 摘要 | 第28页 |
| 1 材料与方法 | 第28-32页 |
| ·细胞 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·病毒总 RNA 的提取 | 第29页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第29页 |
| ·病毒的分离 | 第29-30页 |
| ·病毒蚀斑纯化 | 第30页 |
| ·病毒蚀斑纯化后接毒 RT-PCR 检测 | 第30页 |
| ·PRRSV XF 毒株全基因片段的扩增拼接及基因组相似性比对分析 | 第30-31页 |
| ·PRRSV XF 株间接免疫荧光鉴定 | 第31-32页 |
| 2 结果 | 第32-36页 |
| ·RT-PCR 检测 PRRSV | 第32页 |
| ·病毒分离 | 第32-33页 |
| ·病毒纯化 | 第33页 |
| ·病毒纯化 RT-PCR 检测 | 第33-34页 |
| ·全基因株序列相似性比对 | 第34-35页 |
| ·PRRSV XF 株间接免疫荧光鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3 小结与讨论 | 第36-37页 |
| 试验三 PRRSV XF 毒株的 ORF7 基因的原核表达以及单克隆抗体制备 | 第37-56页 |
| 摘要 | 第37页 |
| 1.材料和方法 | 第37-50页 |
| ·材料 | 第37-41页 |
| ·毒株及菌株 | 第37-38页 |
| ·载体 | 第38页 |
| ·相关的酶试剂 | 第38页 |
| ·分子生物学常用试剂 | 第38页 |
| ·抗体 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 和 western blot 试剂 | 第38-40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-48页 |
| ·引物的设计与合成 | 第41页 |
| ·PRRSV 的 RNA 提取 | 第41页 |
| ·PRRSV ORF7 基因的 RT-PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物的回收和纯化 | 第42页 |
| ·纯化产物的克隆 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第43页 |
| ·连接产物转化 DH5 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的提取 | 第44页 |
| ·菌液 PCR 鉴定 | 第44页 |
| ·ORF7 基因片段的序列测定 | 第44页 |
| ·原核表达载体 pET32 -ORF7 的构建 | 第44-45页 |
| ·ORF7 目的片段的扩增 | 第44页 |
| ·酶切产物的纯化和回收 | 第44页 |
| ·ORF7 基因和原核表达载体 pET32 的连接, 4℃连接过夜 | 第44-45页 |
| ·连接产物转化到 DH5 感受态 | 第45页 |
| ·重组表达质粒的小量提取 | 第45页 |
| ·重组表达质粒的双酶切鉴定以及测序分析 | 第45页 |
| ·重组表达质粒转化到大肠杆菌 BL21（DE3)感受态 | 第45页 |
| ·重组表达质粒 pET32 -ORF7 在大肠杆菌 BL21（DE3)中的诱导表达 | 第45页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第45-46页 |
| ·表达产物的纯化 | 第46-47页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第46页 |
| ·蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·表达产物的 Western blot 检测 | 第47-48页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第48页 |
| ·单克隆抗体制备 | 第48-50页 |
| ·小鼠免疫 | 第48页 |
| ·细胞融合 | 第48-49页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选及克隆 | 第49页 |
| ·间接 ELISA 检测方法建立 | 第49页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第49页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第49页 |
| ·单克隆抗体间接免疫荧光的鉴定 | 第49-50页 |
| ·亚型分析 | 第50页 |
| 2.结果 | 第50-54页 |
| ·ORF7 基因 PCR 扩增结果 | 第50页 |
| ·ORF7 基因片段的序列测定及分析 | 第50-51页 |
| ·原核表达载体 pET32 -ORF7 鉴定 | 第51页 |
| ·原核表达载体 pET32 -ORF7 序列测定 | 第51页 |
| ·原核表达载体 pET32 -ORF7 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第51-52页 |
| ·pET32-ORF7 表达产物的纯化 | 第52页 |
| ·表达产物的 Western blot 鉴定 | 第52-53页 |
| ·纯化蛋白的浓度的测定 | 第53页 |
| ·杂交细胞株的建立及免疫小鼠血清效价 | 第53-54页 |
| ·间接免疫荧光检测单克隆抗体 | 第54页 |
| ·单克隆抗体 Ig 亚型鉴定分析 | 第54页 |
| 3 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| Abstract | 第63-66页 |
| 附录一 PRRSV XF 株基因组 | 第66-75页 |
