| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| ·细小病毒科简介 | 第10-11页 |
| ·细小病毒科的发现及特征 | 第10页 |
| ·细小病毒基因组结构的分类和基因组结构特征 | 第10-11页 |
| ·细小病毒基因组的转录和表达 | 第11页 |
| ·博卡病毒简介 | 第11-15页 |
| ·人博卡病毒的发现、命名和分类 | 第11-12页 |
| ·人博卡病毒基因组结构特征及临床性表现 | 第12-13页 |
| ·HBoV的研究现状 | 第13-14页 |
| ·多克隆抗体制备的原理和特点 | 第14-15页 |
| ·PMAL原核表达系统 | 第15-17页 |
| ·pMAL原核表达系统简介(参考pMAL-c2X系统手册,NEB) | 第15-16页 |
| ·载体pMAL-c2X的相关信息 | 第16-17页 |
| ·PET原核表达系统 | 第17-19页 |
| ·pET原核表达系统简介 | 第17页 |
| ·质粒pET28a的相关信息及克隆构建策略 | 第17-18页 |
| ·原核表达载体pET28a克隆及表达的基本流程 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料 | 第20-25页 |
| ·主要仪器和实验材料 | 第20页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第20页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·常用培养基 | 第20-21页 |
| ·LB液体培养基 | 第20页 |
| ·配制LB固体培养基 | 第20-21页 |
| ·配制含葡萄糖的液体培养基 | 第21页 |
| ·常用溶液和它们的配置 | 第21-23页 |
| ·配置琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第21页 |
| ·碱性裂解法提取质粒DNA所用试剂 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)所用溶液 | 第21-22页 |
| ·Western blot相关缓冲液 | 第22页 |
| ·蛋白纯化时所用试剂 | 第22-23页 |
| ·酶联免疫吸附技术(Enzyme-Linked Immunosorbent Assa,ELISA)相关缓冲液 | 第23页 |
| ·透析缓冲液 | 第23页 |
| ·透析袋处理液 | 第23页 |
| ·透析缓冲液 | 第23页 |
| ·各种抗生素 | 第23-25页 |
| ·氨苄青霉素(Ampicillin,Amp) | 第23-24页 |
| ·卡那霉素(kalamycin,kana) | 第24页 |
| ·异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-ThiogalactopyranosideIPTG) | 第24页 |
| ·5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactopyranoside,X-Gal) | 第24-25页 |
| 第三章 实验方法 | 第25-30页 |
| ·人博卡病毒(HBoV)结构蛋白独特区基因VP1u和非结构蛋白未知区域基因ORFx,基因NP1的克隆及原核表达 | 第25-28页 |
| ·设计与合成引物 | 第25页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| ·诱导并表达融合蛋白 | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第27页 |
| ·Western-Blot鉴定融合蛋白 | 第27-28页 |
| ·多克隆抗体的制备和它们的检测 | 第28-30页 |
| ·融合蛋白MBP-NP1,MBP-ORFx,MBP-VP1u的大量制备及Amylose亲和层析柱纯化(参照PMAL纯化手册,NEB) | 第28页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第28-29页 |
| ·多克隆抗体效价测定及Western-Blot分析 | 第29-30页 |
| 第四章 实验结果 | 第30-48页 |
| ·人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白基因NP1,ORFx,结构蛋白基因VP1u的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 | 第30-37页 |
| ·结构蛋白基因VP1u的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 | 第30-37页 |
| ·非结构蛋白基因ORFx的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 | 第37-42页 |
| ·PCR扩增目的片段ORFx | 第37-38页 |
| ·重组表达载体pMAL-ORFx的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白MBP-ORFx的诱导表达及Western blot检测 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白MBP-ORFx的纯化 | 第40-41页 |
| ·Factor Xa对MBP-ORFx融合蛋白的酶切 | 第41页 |
| ·多克隆抗体的Western blot分析 | 第41-42页 |
| ·非结构蛋白基因NP1的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 | 第42-48页 |
| ·PCR扩增目的片段NP1 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体pMAL-c2X-NP1的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白MBP-NP1的诱导表达及条件优化 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白MBP-NP1的纯化及Western blot分析 | 第45-46页 |
| ·Factor Xa对MBP-NP1融合蛋白酶切及抗体特异性检测 | 第46-48页 |
| 第五章 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献(REFERENCES) | 第50-54页 |
| 硕士期间发表论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
