| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第10-23页 |
| 1 香蕉束顶病毒概述 | 第10-16页 |
| ·香蕉束顶病毒的分类地位及特征 | 第10页 |
| ·BBTV在寄主上的表现症状及传播方式 | 第10-11页 |
| ·香蕉束顶病毒分子生物学研究进展 | 第11-14页 |
| ·BBTV基因组结构研究 | 第11-12页 |
| ·BBTV各组份编码蛋白的研究 | 第12-14页 |
| ·BBTV的复制与转录 | 第14页 |
| ·香蕉束顶病的防治 | 第14-16页 |
| 2 酵母双杂交系统 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第16页 |
| ·酵母双杂交系统的优点及局限性 | 第16-17页 |
| 3 酵母双杂交技术在植物病毒学上的应用 | 第17-21页 |
| ·酵母双杂交系统在病毒粒体分子结构和装配研究中的应用 | 第18页 |
| ·酵母双杂交系统在病毒核酸复制及基因表达调控研究中的应用 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交系统在病毒编码蛋白联系图谱研究中的应用 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统在病毒运动模式研究中的应用 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统在病毒致病机制研究中的应用 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交系统在病毒介体传播的分子机制研究中的应用 | 第21页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 5 本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 下篇 研究内容 | 第23-58页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·质粒和菌株 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·数据分析软件 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-41页 |
| ·BBTV DNA5编码蛋白诱饵载体的构建 | 第25-31页 |
| ·香蕉病叶总DNA的提取 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·BBTV DNA5编码基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的检测和回收 | 第27页 |
| ·目的片段与pMD19-T simple克隆载体连接 | 第27-28页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌Trans5α | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆的质粒提取 | 第29页 |
| ·阳性克隆质粒的酶切鉴定和诱饵质粒pGBKT7的双酶切 | 第29-30页 |
| ·目的条带胶回收 | 第30页 |
| ·目的片段与诱饵载体连接 | 第30页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌Trans5α | 第30页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第30页 |
| ·阳性克隆质粒提取 | 第30-31页 |
| ·重组载体的双酶切鉴定 | 第31页 |
| ·酵母双杂交诱饵载体的自激活和毒性检验 | 第31-33页 |
| ·酵母双杂交报告菌株Y2HGold表型的鉴定 | 第31页 |
| ·Y2HGold酵母感受态细胞的制度 | 第31页 |
| ·诱饵质粒转化酵母感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·菌株的保存与复苏 | 第33页 |
| ·诱饵质粒的自激活活性检测 | 第33页 |
| ·诱饵质粒对Y2H Gold酵母菌的毒性检测 | 第33页 |
| ·感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建 | 第33-38页 |
| ·染病香蕉叶片总RNA的提取 | 第34页 |
| ·双链cDNA合成和短片段去除 | 第34-35页 |
| ·双链cDNA的酶切处理 | 第35页 |
| ·cDNA片段的割胶回收 | 第35页 |
| ·ds cDNA与pGADT7-SfiI载体连接 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌E.coli Electro-cell宿主菌中 | 第36页 |
| ·初始文库的收集 | 第36页 |
| ·初始文库滴度测定 | 第36-37页 |
| ·文库扩增和滴度测定 | 第37页 |
| ·文库质粒的抽提和鉴定 | 第37页 |
| ·cDNA插入片段大小的检测 | 第37-38页 |
| ·与诱饵蛋白互作的寄主因子的筛选及初步鉴定 | 第38-41页 |
| ·含有诱饵质粒的Y2H Gold酵母菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·文库质粒大规模转化含有诱饵质粒的Y2H Gold酵母感受态细胞 | 第39页 |
| ·高精度营养缺陷型培养基筛选阳性克隆 | 第39-40页 |
| ·酵母菌落PCR初步确定阳性克隆 | 第40页 |
| ·阳性克隆酵母质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·酵母质粒PCR | 第41页 |
| ·酵母质粒转化大肠杆菌Trans5α | 第41页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第41页 |
| ·文库转化子质粒的提取 | 第41页 |
| ·两蛋白互作的初步验证 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-53页 |
| ·诱饵载体的构建及自激活和毒性检测 | 第41-44页 |
| ·BBTV DNA5编码基因的克隆和重组载体的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·酵母菌株Y2H Gold表型的鉴定 | 第42-43页 |
| ·诱饵载体的自激活活性检测 | 第43-44页 |
| ·诱饵载体对Y2H Gold菌株细胞毒性的检测 | 第44页 |
| ·感染BBTV香蕉叶片的酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第44-48页 |
| ·感染BBTV香蕉叶片总RNA的提取 | 第44-45页 |
| ·双链cDNA的合成及短片段去除 | 第45-46页 |
| ·初级文库库容量的计算和滴度的测定 | 第46页 |
| ·文库质粒的抽提及鉴定 | 第46-47页 |
| ·文库插入片段的检测和重组率的计算 | 第47-48页 |
| ·酵母双杂交技术筛选互作的阳性克隆及分析 | 第48-53页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的顺序转化验证 | 第49页 |
| ·阳性克隆的测序结果分析 | 第49-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·香蕉叶片中与BBTV DNA5编码蛋白互作的蛋白分析 | 第53-55页 |
| ·感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建 | 第55-56页 |
| ·酵母双杂交假阳性和假阴性问题 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
| 附录1 缩略词表 | 第64-65页 |
| 附录2 主要试剂、培养基及缓冲液配制 | 第65-67页 |
| 附录3 所用载体图谱 | 第67-69页 |
| 项目资助 | 第69-70页 |
| 攻读硕士期间发表或者待发表的文章 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
