| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 主要仪器 | 第9-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-35页 |
| 1 骨骼肌系统 | 第18-21页 |
| ·骨骼肌的起源与发生 | 第18-19页 |
| ·骨骼肌的起源 | 第18页 |
| ·骨骼肌群 | 第18-19页 |
| ·骨骼肌的不同阶段 | 第19页 |
| ·肌纤维类型 | 第19页 |
| ·骨骼肌成体干细胞 | 第19-21页 |
| ·骨骼肌卫星细胞 | 第19-21页 |
| ·肌源干细胞 | 第21页 |
| 2 生肌调控分子机制 | 第21-25页 |
| ·成肌调节因子家族 | 第21-23页 |
| ·成肌决定调节因子 | 第22-23页 |
| ·成肌分化调节因子 | 第23页 |
| ·成肌加强因子2 | 第23-24页 |
| ·MSTN与双肌 | 第24页 |
| ·生肌转录的调节途径 | 第24-25页 |
| 3 MYOD1基因研究进展 | 第25-26页 |
| ·MYOD1基因的结构 | 第25页 |
| ·MYOD1基因的生物学功能 | 第25页 |
| ·MYOD1基因多态性研究 | 第25-26页 |
| 4 MYOG基因研究进展 | 第26-27页 |
| ·MYOG基因的结构 | 第26页 |
| ·MYOG基因的生物学功能 | 第26-27页 |
| ·MYOG多态性研究 | 第27页 |
| 5 转基因技术与羊新品种创制 | 第27-30页 |
| ·转基因技术与转基因羊 | 第27-28页 |
| ·原核注射制备转基因动物 | 第28页 |
| ·慢病毒法感染法制备转基因动物 | 第28页 |
| ·体细胞克隆法制备转基因动物 | 第28页 |
| ·精原干细胞介导制备转基因动物 | 第28-30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二章 山羊骨骼肌卫星细胞的分离与成肌分化 | 第35-46页 |
| 1 材料与方法 | 第35-38页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·实验试剂 | 第35页 |
| ·实验耗材 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·徐淮山羊SMSCs原代细胞的分离 | 第36页 |
| ·山羊骨骼肌卫星细胞的传代 | 第36页 |
| ·gSMSCs的冻存与复苏 | 第36-37页 |
| ·gSMSCs的鉴定 | 第37-38页 |
| ·gSMSCs生长速度的测定 | 第38页 |
| ·gSMSCs成肌诱导 | 第38页 |
| 2 结果 | 第38-42页 |
| ·GSMSCs的分离与鉴定 | 第38-39页 |
| ·GSMSCs生长速度测定 | 第39-40页 |
| ·GSMSCs成肌诱导 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 第三章 山羊成肌调节因子(MYOD1、MYOG)的克隆与生物信息学分析 | 第46-57页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌种、细胞和质粒 | 第46页 |
| ·工具酶、试剂与引物 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·PCR体外扩增MyoD1、MyoG基因CDS及TA克隆 | 第47-48页 |
| ·山羊MyoD1、MyoG生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-54页 |
| ·山羊MYOD1、MYOG基因的体外扩增与克隆 | 第49-50页 |
| ·MYOD1、MYOG生物信息学分析 | 第50-54页 |
| ·MyoD1、MyoG基因序列测定与同源性分析 | 第50-51页 |
| ·MyoD1、MyoG蛋白信号肽分析 | 第51页 |
| ·MyoD1、MyoG蛋白亲疏水性预测 | 第51页 |
| ·MyoD1、MyoG蛋白磷酸化位点、O端糖基化位点和N端糖基化位点预测 | 第51-53页 |
| ·MyoD1、MyoG蛋白亚细胞定位预测 | 第53-54页 |
| ·MyoD1、MyoG蛋白结构域 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第四章 □过表达MYOD1基因山羊胎儿皮肤成纤维细胞系建立及其成肌诱导分化研究 | 第57-69页 |
| 1 材料与方法 | 第58-60页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·实验试剂 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-60页 |
| ·徐淮山羊皮肤成纤维细胞的分离 | 第58-59页 |
| ·G418对GSF细胞最小致死量的测定 | 第59页 |
| ·徐淮山羊MyoD1真核表达载体的构建与亚细胞定位 | 第59-60页 |
| ·MyoD1-eGFP过表达真皮成纤维细胞株的建立 | 第60页 |
| ·MyoD1异位表达GSF的成肌分化 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-65页 |
| ·徐淮山羊皮肤成纤维细胞的分离 | 第60-61页 |
| ·G418对GSF最小致死量的测定 | 第61-62页 |
| ·PEGFP-MYOD1真核融合表达载体的构建与亚细胞定位 | 第62-63页 |
| ·pEGFP-MyoD1真核融合表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·MyoD1真核表达与亚细胞定位 | 第63页 |
| ·建立过表达MYOD1-EGFP的GSF细胞株 | 第63-64页 |
| ·MYOD1异位表达GSF细胞株的成肌分化 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| 第五章 MYOG真核表达载体构建与基因免疫法制备抗MYOG血清 | 第69-78页 |
| 1 材料与方法 | 第69-72页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·质粒、动物 | 第69页 |
| ·实验试剂 | 第69-70页 |
| ·方法 | 第70-72页 |
| ·MyoG真核表达载体的构建 | 第70页 |
| ·pEGFP-MyoG转染山羊胎儿皮肤成纤维细胞 | 第70页 |
| ·基因免疫法制备抗羊MyoG血清 | 第70-72页 |
| 2 结果 | 第72-75页 |
| ·PCDNA3.0-MYOG和PEGFP-MYOG真核表达载体的鉴定 | 第72页 |
| ·MYOG异位表达与亚细胞定位 | 第72-74页 |
| ·MyoG蛋白的初级结构及亚细胞定位 | 第73页 |
| ·重组质粒pEGFP-MyoG转染山羊胎儿成纤维细胞 | 第73页 |
| ·转染细胞MyoG蛋白表达检测 | 第73-74页 |
| ·基因免疫法制备抗羊MYOG血清 | 第74-75页 |
| ·IFA检测抗血清效价 | 第74-75页 |
| ·抗体特异性检测 | 第75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-78页 |
| 第六章 睾丸注射法制备转MYOD1、MYOG基因羊 | 第78-90页 |
| 1 材料和方法 | 第78-81页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·试验动物 | 第78页 |
| ·主要试剂 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-81页 |
| ·睾丸注射法制备转MyoD1基因小鼠 | 第79-80页 |
| ·睾丸注射法制备转基因羊 | 第80-81页 |
| 2 结果 | 第81-86页 |
| ·睾丸注射法制备转MYOD1基因小鼠 | 第81-84页 |
| ·睾丸注射法制备转MyoD1基因小鼠 | 第81-83页 |
| ·G1小鼠的检测 | 第83-84页 |
| ·睾丸注射法制备转MYOD1湖羊与转MYOG山羊 | 第84-86页 |
| ·睾丸注射法制备转MyoD1湖羊 | 第84-85页 |
| ·睾丸注射法制备转MyoG山羊 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-87页 |
| 4 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-90页 |
| 附件一 肌纤维的类型 | 第90-91页 |
| 附件二 睾丸注射法制备转基因动物配种与产子记录 | 第91-94页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
