海水弧菌耐药性I类整合子分析与副溶血弧菌分子分型研究
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述及目的意义 | 第12-18页 |
| 1 文献综述 | 第12-16页 |
| ·弧菌及弧菌病简介 | 第12-13页 |
| ·海水养殖弧菌耐药现状 | 第13-14页 |
| ·细菌的耐药性 | 第14-15页 |
| ·细菌耐药机制 | 第14页 |
| ·整合子-基因盒介导的耐药及其在弧菌中的研究 | 第14-15页 |
| ·副溶血弧菌的分子分型研究 | 第15-16页 |
| ·副溶血弧菌毒力因子 | 第15页 |
| ·副溶血弧菌多位点序列分型 | 第15-16页 |
| 2 本论文研究的目的意义 | 第16-18页 |
| 第二部分 论文实验 | 第18-62页 |
| 第一章 细菌分离培养、鉴定与保存 | 第18-27页 |
| 1 材料与方法 | 第18-20页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·水样与病样 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-20页 |
| ·分离培养 | 第19-20页 |
| ·模板的制取和HSP60基因鉴定细菌 | 第20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和序列处理 | 第20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-23页 |
| ·弧菌属HSP60基因构建系统进化树 | 第20-21页 |
| ·分离菌株构成分析 | 第21-23页 |
| ·分离菌株种群分析 | 第22页 |
| ·分离菌株来源地域分析 | 第22-23页 |
| ·分离菌株在养殖品种中的分布情况 | 第23页 |
| 3 结论与讨论 | 第23-26页 |
| ·分离培养与菌种鉴定 | 第23-25页 |
| ·分离培养 | 第23-24页 |
| ·菌种鉴定 | 第24-25页 |
| ·分离菌株组成分析 | 第25-26页 |
| ·弧菌组成与地域的相关性 | 第25页 |
| ·弧菌组成与养殖品种的相关性 | 第25-26页 |
| 4 本章小结 | 第26-27页 |
| 第二章 分离菌株耐药性检测 | 第27-36页 |
| 1 材料与方法 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·培养基与药敏纸片 | 第27-28页 |
| ·质控菌株 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·方法 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-33页 |
| ·药敏试验结果 | 第28-29页 |
| ·分离菌株对15种抗生素的耐药谱分析 | 第29-33页 |
| 3 结论与讨论 | 第33-35页 |
| ·抗菌药物敏感性的实验方法 | 第33页 |
| ·我国养殖弧菌耐药情况现状及流行趋势 | 第33-35页 |
| ·从总体耐药性看弧菌耐药情况 | 第33-34页 |
| ·从耐药谱方面看弧菌耐药情况 | 第34页 |
| ·从不同省份分离菌株看弧菌耐药情况 | 第34-35页 |
| ·抗生素的合理使用 | 第35页 |
| 4 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 分离弧菌典型Ⅰ类整合子-基因盒的检测 | 第36-48页 |
| 1 材料与方法 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·菌株 | 第36-37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·引物 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·模板的制取和扩增整合子PCR体系 | 第38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及目的条带的回收 | 第38页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第38-39页 |
| ·感受态的制备 | 第39页 |
| ·重组质粒的转化与阳性菌株的筛选 | 第39-40页 |
| ·测序与序列分析 | 第40页 |
| ·整合子-基因盒可变区的扩增 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| ·整合子5'整合酶和3'端保守区扩增 | 第40-43页 |
| ·保守区扩增结果统计 | 第40-41页 |
| ·扩增电泳图 | 第41页 |
| ·测序结果与序列分析 | 第41-43页 |
| ·耐药基因盒的检测 | 第43-44页 |
| 3 讨论与结论 | 第44-47页 |
| ·整合子-基因盒的检测技术 | 第45页 |
| ·耐药表型与整合子-基因盒的检测 | 第45-46页 |
| ·海水养殖创伤弧菌中首次发现完整的Ⅰ类整合子 | 第46-47页 |
| 4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 副溶血弧菌分子分型研究 | 第48-62页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·菌株 | 第48-49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·引物 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·菌株基因组DNA的提取 | 第50页 |
| ·PCR扩增MLST分型基因 | 第50页 |
| ·MLST分型序列分析 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增副溶血弧菌毒力基因 | 第51页 |
| 2 实验结果 | 第51-58页 |
| ·毒力基因检测 | 第51-52页 |
| ·毒力基因扩增结果 | 第51-52页 |
| ·毒力基因检测结果统计 | 第52页 |
| ·MLST分型结果 | 第52-56页 |
| ·MLST扩增结果 | 第52-53页 |
| ·等位基因获取结果 | 第53页 |
| ·菌株的ST型获取结果 | 第53-56页 |
| ·副溶血弧菌分型聚类分析 | 第56-58页 |
| ·BURST在线分析结果 | 第56-57页 |
| ·SplitsTree建树结果 | 第57-58页 |
| ·Tree drawing建树结果 | 第58页 |
| 3 结论与讨论 | 第58-61页 |
| ·副溶血弧菌的毒力基因 | 第58-59页 |
| ·MLST在细菌分型中的应用 | 第59-60页 |
| ·分离副溶血弧菌的MLST | 第60-61页 |
| 4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第三部分 全文总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第71页 |
