| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1. 植物细胞色素P450 | 第11-20页 |
| ·细胞色素P450在植物中的分布及研究进展 | 第11-12页 |
| ·植物细胞色素P450的命名和分类 | 第12-13页 |
| ·植物细胞色素P450的命名 | 第12页 |
| ·植物细胞色素P450的分类 | 第12-13页 |
| ·植物细胞色素P450的结构与性质 | 第13-14页 |
| ·植物细胞色素P450的性质 | 第13-14页 |
| ·植物细胞色素P450的结构 | 第14页 |
| ·植物细胞色素P450的作用机制 | 第14-15页 |
| ·植物细胞色素P450的生物学功能 | 第15-17页 |
| ·生物合成功能 | 第15-16页 |
| ·代谢解毒 | 第16-17页 |
| ·植物细胞色素P450基因的表达调控 | 第17-18页 |
| ·植物细胞色素P450的表达研究 | 第18-20页 |
| ·微生物表达系统 | 第18-19页 |
| ·植物表达系统 | 第19-20页 |
| 2. 苦荞及其抗逆生理 | 第20-21页 |
| ·苦荞简介 | 第20-21页 |
| ·苦荞的抗逆生理 | 第21页 |
| 3. 研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 苦荞细胞色素P450基因的克隆 | 第22-40页 |
| 1. 材料和方法 | 第22-30页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·材料和菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂和药品 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·主要溶液 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-30页 |
| ·苦荞花RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·RNA的纯度和浓度的检测 | 第24页 |
| ·第一链cDNA的制备 | 第24-26页 |
| ·苦荞细胞色素P450基因的克隆 | 第26-30页 |
| 2. 结果 | 第30-38页 |
| ·苦荞花的RNA的提取 | 第30页 |
| ·苦荞细胞色素P450基因的克隆 | 第30-32页 |
| ·苦荞细胞色素P45基因的序列分析 | 第32-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-40页 |
| ·FtP450-R4基因的同源克隆 | 第38-39页 |
| ·FtP450-R4基因的序列分析 | 第39-40页 |
| 第三章 苦荞细胞色素P450基因的原核表达 | 第40-49页 |
| 1. 材料和方法 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·质粒和菌株 | 第40页 |
| ·主要试剂和药品 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·FtP450-R4融合表达载体的构建 | 第41页 |
| ·FtP450-R4的原核表达 | 第41页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的粗酶活测定 | 第42-43页 |
| ·TLC法定性检测FtP450-R4活性 | 第43页 |
| 2. 结果 | 第43-47页 |
| ·pET-30b(+)-FtP450-R4融合表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·FtP450-R4的原核表达 | 第44-45页 |
| ·FtP450-R4活性的定性鉴定 | 第45-46页 |
| ·反应液波谱段扫描 | 第46-47页 |
| 3. 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 逆境胁迫对芽期苦荞细胞色素P450表达和黄酮含量的影响 | 第49-59页 |
| 1. 材料和方法 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·主要试剂和药品 | 第49页 |
| ·所用的溶液 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·苦荞种子萌发 | 第50页 |
| ·胁迫条件 | 第50页 |
| ·子叶和胚轴RNA的检测 | 第50-51页 |
| ·子叶和胚轴RNA的提取和cDNA第一链的制备 | 第51页 |
| ·半定量RT-PCR | 第51页 |
| ·苦荞总黄酮的提取和测定 | 第51-52页 |
| 2. 结果 | 第52-57页 |
| ·苦荞子叶和胚轴总RNA提取 | 第52-53页 |
| ·RNA浓度测定 | 第53页 |
| ·苦荞FtP450-R4基因的表达量分析 | 第53-55页 |
| ·芦丁标准曲线的建立 | 第55-56页 |
| ·子叶和胚轴中总黄酮的测定 | 第56-57页 |
| 3. 讨论 | 第57-59页 |
| ·半定量RT-PCR技术 | 第57页 |
| ·逆境胁迫下苦荞黄酮与FtP450-R4基因的表达量 | 第57-59页 |
| 结论与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
