| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-25页 |
| ·猪圆环病毒 | 第16-22页 |
| ·PCV2 自然感染的致病机制 | 第16-17页 |
| ·圆环病毒基因组特征及研究进展 | 第17-18页 |
| ·ORF1 基因的研究 | 第17页 |
| ·ORF2 基因的研究 | 第17页 |
| ·ORF3 基因的研究 | 第17-18页 |
| ·圆环病毒衣壳结构研究进展 | 第18-22页 |
| ·PCV2 衣壳蛋白的装配方式 | 第18页 |
| ·PCV2 衣壳结构解析的重要性 | 第18-19页 |
| ·PCV2 衣壳蛋白的基本构造特征 | 第19页 |
| ·PCV2 衣壳蛋白表面的抗原位点 | 第19-21页 |
| ·PCV2 基于结构的侵染机制 | 第21-22页 |
| ·口蹄疫病毒 | 第22-25页 |
| ·FMDV 的持续性感染 | 第22页 |
| ·FMDV P1 区与衣壳蛋白 | 第22-23页 |
| ·FMDV 抗原表位 | 第23页 |
| ·G-H 环合成肽仿制品 | 第23-25页 |
| ·载体蛋白和病毒嵌合体 | 第23-24页 |
| ·环合肽 | 第24页 |
| ·逆向-倒转肽类似物 | 第24-25页 |
| 第二章 N 端嵌合口蹄疫病毒中和表位的猪圆环病毒衣壳蛋白表达与免疫原性研究 | 第25-48页 |
| ·重组蛋白 PCV2 ORF2-VP1 和原衣壳蛋白 PCV2 ORF2 结构预测分析 | 第25-27页 |
| ·方法 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒 PET28A-ORF2-VP1(N)，PET28A-ORF2 的构建 | 第27-35页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·病料 | 第27页 |
| ·表达载体和感受态细胞 | 第27页 |
| ·酶和试剂 | 第27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·实验所需溶液 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳制备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·重组表达质粒 pET28a-ORF2 的构建 | 第28-31页 |
| ·病毒 DNA 的提取 | 第28页 |
| ·PCV2 ORF2 基因 PCR | 第28-29页 |
| ·PCV2 ORF2 DNA 纯化 | 第29页 |
| ·pGEM T-ORF2 的构建 | 第29-31页 |
| ·回收片段 PCV2 ORF2 与克隆载体 pGEM-T 载体的连接 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·重组质粒 pGEM T-ORF2 质粒的提取 | 第30页 |
| ·重组质粒 pGEM T-ORF2 质粒的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·pET28a-ORF2 的构建 | 第31页 |
| ·N 端嵌合 FMDV 表位重组表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·N 端嵌合 FMDV 表位的 PCV2 ORF2 基因的优化合成 | 第31页 |
| ·pET28a-ORF2-VP1 的构建 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-34页 |
| ·基因扩增 | 第32页 |
| ·pET28a-ORF2 的构建 | 第32-33页 |
| ·pET28a-ORF2-VP1(N)的构建 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白 PCV2 ORF2-VP1(N)与衣壳蛋白 PCV2 ORF2 的原核表达、纯化与复性 | 第35-41页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞 | 第35页 |
| ·酶和主要试剂 | 第35页 |
| ·仪器 | 第35页 |
| ·实验所需溶液 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）所用溶液 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·重组质粒 pET28a-ORF2-VP1(N)，pET28a-ORF2 的诱导表达 | 第36页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第36页 |
| ·包涵体裂解 | 第36-37页 |
| ·蛋白质纯化 | 第37页 |
| ·蛋白质复性 | 第37页 |
| ·复性蛋白活性检测 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-40页 |
| ·重组蛋白 PCV2 ORF2-VP1(N)与衣壳蛋白 PCV2 ORF2 的表达形式鉴定 | 第38页 |
| ·重组蛋白 PCV2 ORF2-VP1(N)与衣壳蛋白 PCV2 ORF2 纯化结果分析 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白 PCV2 ORF2-VP1(N)与衣壳蛋白 PCV2 ORF2 复性后免疫反应性检测 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白 ORF2-VP1(N)与衣壳蛋白 ORF2 的免疫原性测定 | 第41-48页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·抗原制备 | 第41-42页 |
| ·实验分组 | 第42页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第42页 |
| ·细胞因子测定 | 第42-43页 |
| ·免疫小鼠血清 FMDV 抗体检测 | 第43-44页 |
| ·FMDV 特异性抗体水平检测 | 第43页 |
| ·FMDV 中和抗体滴度测定 | 第43-44页 |
| ·免疫小鼠血清 PCV2 抗体检测 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白免疫小鼠细胞因子水平测定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白免疫小鼠 FMDV 抗体水平检测 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白免疫小鼠 PCV2 抗体水平检测 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 LOOP 环替换口蹄疫病毒中和表位的猪圆环病毒衣壳蛋白表达与免疫原性研究 | 第48-62页 |
| ·重组蛋白 ORF2-VP1 (CD), ORF2-VP1 (EF), ORF2-VP1 (GH), ORF2-VP1 (ALL)结构预测分析 | 第48-50页 |
| ·方法 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·重组表达质粒 PET28A-ORF2-VP1 (CD), PET28A-ORF2-VP1 (EF), PET28A-ORF2-V P1 (GH), PET28A-ORF2-VP1 (ALL)的构建 | 第50-52页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-51页 |
| ·Loop 环替换 FMDV 表位基因的优化合成 | 第50页 |
| ·重组表达质粒 pET28a-ORF2-VP1 (CD), pET28a-ORF2-VP1 (EF), pET28a -ORF2-VP1 (GH), pET28a-ORF2-VP1 (All)的构建 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白 ORF2-VP1 (CD), ORF2-VP1 (EF), ORF2-VP1 (GH), ORF2-VP1 (ALL)的 原核表达、纯化与复性 | 第52-56页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-55页 |
| ·重组蛋白 ORF2-VP1(CD), ORF2-VP1(EF), ORF2-VP1(GH), ORF2-VP1(All)的表达形式鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白 ORF2-VP1(CD), ORF2-VP1(EF), ORF2-VP1(GH), ORF2-VP1(All)纯化结果分析 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白 ORF2-VP1(CD), ORF2-VP1(EF), ORF2-VP1(GH), ORF2-VP1(All)复性后免疫反应性检测 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白 ORF2-VP1(CD), ORF2-VP1(EF), ORF2-VP1(GH), ORF2-VP1(ALL)的免疫原性测定 | 第56-62页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-57页 |
| ·抗原制备 | 第56页 |
| ·实验分组 | 第56页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第56页 |
| ·细胞因子测定 | 第56-57页 |
| ·免疫小鼠血清 FMDV 中和抗体滴度测定 | 第57页 |
| ·免疫小鼠血清 PCV2 抗体检测 | 第57页 |
| ·实验结果 | 第57-60页 |
| ·重组蛋白免疫小鼠细胞因子水平测定 | 第57-59页 |
| ·重组蛋白免疫小鼠 FMDV LPB-ELISA 抗体水平检测 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白免疫小鼠 PCV2 抗体水平检测 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
