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酶转化法合成β-丙氨酸关键基因的重组表达及转化研究

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第一章 绪论第8-15页
   ·β-丙氨酸第8-12页
     ·β-丙氨酸简介第8页
     ·β-丙氨酸的应用第8-10页
     ·β-丙氨酸的生产方法第10-12页
   ·L-天冬氨酸 α-脱羧酶的性质及应用第12-13页
   ·L-天冬氨酸 α-脱羧酶的研究现状第13-14页
   ·本课题的立题意义和研究内容第14-15页
     ·立题意义第14页
     ·本课题的主要研究内容第14-15页
第二章 材料与方法第15-23页
   ·实验材料第15-16页
     ·菌株与质粒第15页
     ·培养基第15页
     ·工具酶及主要试剂第15页
     ·主要仪器第15-16页
   ·方法第16-23页
     ·基因组 DNA 的提取第16页
     ·L-天冬氨酸 -脱羧酶的克隆第16-17页
     ·重组大肠杆菌表达质粒的构建第17-18页
     ·重组大肠杆菌的诱导表达及鉴定第18页
     ·重组菌目的蛋白表达量和酶转化功能比较第18-19页
     ·重组菌生长曲线的测定第19页
     ·重组 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的高效表达第19-20页
     ·重组大肠杆菌 10 L 发酵罐生产重组蛋白 PanD第20页
     ·重组蛋白的纯化第20页
     ·重组 PanD 脱羧酶酶学性质研究第20-21页
     ·重组 PanD 转化生产β-丙氨酸反应过程的考察第21-22页
     ·L-天冬氨酸 -脱羧酶酶活力的测定第22页
     ·菌体生物量的测定第22页
     ·蛋白含量的测定第22页
     ·常见其他分子克隆操作第22-23页
第三章 结果与讨论第23-48页
   ·L-天冬氨酸 -脱羧酶基因在大肠杆菌中的克隆表达第23-30页
     ·大肠杆菌 MG1655 和谷氨酸棒杆菌 ATCC13032 panD 基因的克隆第23-24页
     ·重组质粒及重组菌的构建第24-26页
     ·重组菌的诱导表达第26-27页
     ·L-天冬氨酸 -脱羧酶 PanD 酶活力检测方法的确立第27-28页
     ·两株重组菌目的蛋白表达量及酶转化功能比较第28-30页
   ·重组 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的高效表达第30-37页
     ·重组菌株生长曲线的测定第30-31页
     ·重组菌诱导条件的优化第31-35页
     ·重组菌发酵罐诱导培养第35-37页
   ·重组 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的纯化及酶学性质研究第37-42页
     ·重组 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的纯化第37-39页
     ·L-天冬氨酸α-脱羧酶酶学性质的研究第39-42页
   ·重组酶转化过程的研究第42-48页
     ·底物 L-天冬氨酸对重组 PanD 转化反应的影响第42-44页
     ·产物β-丙氨酸对重组 PanD 转化反应的影响第44页
     ·酶转化反应方式对转化率的影响第44-48页
主要结论与展望第48-50页
 主要结论第48页
 展望第48-50页
致谢第50-51页
参考文献第51-54页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第54页

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