| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 1 引言 | 第12-18页 |
| ·重组抗体药物研究进展 | 第12-13页 |
| ·肿瘤坏死因子受体- Fc 融合蛋白的研究 | 第13-15页 |
| ·类风湿性关节炎 | 第13页 |
| ·肿瘤坏死因子 | 第13-14页 |
| ·肿瘤坏死因子受体 | 第14-15页 |
| ·肿瘤坏死因子受体-Fc 融合蛋白的研究进展 | 第15页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统 | 第15-18页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统研究进展 | 第15-17页 |
| ·Bac- to- Bac 系统 | 第17-18页 |
| 2 实验方案设计 | 第18-21页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-20页 |
| ·实验流程图 | 第20-21页 |
| 3 rhTNFR-Fc 基因的生物信息学分析 | 第21-26页 |
| ·序列与工具 | 第21页 |
| ·序列 | 第21页 |
| ·生物信息学工具与软件 | 第21页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第21-25页 |
| ·rhTNFR-Fc 基因序列比对 | 第21-22页 |
| ·疏水性分析 | 第22-23页 |
| ·跨膜区分析 | 第23-24页 |
| ·信号肽分析 | 第24页 |
| ·二级结构预测 | 第24-25页 |
| ·高级结构预测 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 4 rhTNFR-Fc 基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 | 第26-43页 |
| ·材料与试剂 | 第26-27页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·主要溶剂的配制 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-36页 |
| ·重组转移载体的构建 | 第27-30页 |
| ·重组 Bacmid-(rhTNFR-Fc)的构建 | 第30-32页 |
| ·家蚕细胞 BmN 的复苏、培养与冻存 | 第32-33页 |
| ·重组病毒 vBm-(rhTNFR-Fc)的构建 | 第33-34页 |
| ·rhTNF-Fc 蛋白在家蚕 BmN 细胞中的表达及鉴定 | 第34-35页 |
| ·rhTNFR-Fc 蛋白在家蚕蚕血淋巴中的表达及鉴定 | 第35-36页 |
| ·rhTNFR-Fc 蛋白在家蚕蚕蛹中的表达及鉴定 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-42页 |
| ·PCR 扩增 rhTNFR-Fc 基因片段结果 | 第36页 |
| ·重组质粒 pFastBac Ⅰ-（rhTNFR-Fc）的鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·重组 Bacmid-(rhTNFR-Fc)的 PCR 鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·重组病毒 vBm-(rhTNFR-Fc)的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·家蚕 BmN 细胞中 rhTNFR-Fc 蛋白的 Western Blotting 鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·家蚕 BmN 细胞中 rhTNFR-Fc 蛋白的免疫荧光鉴定结果 | 第40页 |
| ·家蚕蚕血淋巴中 rhTNFR-Fc 蛋白的 Western Blotting 鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·家蚕蚕蛹中 rhTNFR-Fc 蛋白的 SDS-PAGE 和 Western Blotting 鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| 5 融合蛋白 rhTNFR-Fc 的纯化 | 第43-56页 |
| ·材料与试剂 | 第43页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·家蚕 BmN 细胞中 rhTNFR-Fc 融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·家蚕五龄幼虫血淋巴中的 rhTNFR-Fc 融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·纯化后 rhTNFR-Fc 融合蛋白的质谱分析 | 第45页 |
| ·纯化后 rhTNFR-Fc 融合蛋白的糖基化修饰初步分析 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-54页 |
| ·家蚕 BmN 细胞中 rhTNFR-Fc 融合蛋白的纯化结果 | 第46-47页 |
| ·家蚕五龄幼虫血淋巴中 rhTNFR-Fc 融合蛋白的纯化结果 | 第47-50页 |
| ·纯化后 rhTNFR-Fc 融合蛋白的质谱鉴定结果 | 第50-52页 |
| ·纯化后 rhTNFR-Fc 融合蛋白的糖基化修饰分析结果 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 6 rhTNFR-Fc 融合蛋白的生物学活性测定 | 第56-63页 |
| ·材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·主要试剂配制 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·夹心 ELISA 法检测 rhTNFR-Fc 融合蛋白的受体结合活性 | 第57-58页 |
| ·L929 细胞的培养 | 第58-59页 |
| ·MTT 法检测 rhTNFR-Fc 融合蛋白的中和活性 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-62页 |
| ·融合蛋白 rhTNFR-Fc 的结合活性测定结果 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白 rhTNFR-Fc 的中和活性测定结果 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
