| 目录 | 第1-7页 |
| 图目录 | 第7-8页 |
| 表目录 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 符号与缩略语说明 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 引言 | 第15-16页 |
| 2 生防菌的拮抗作用研究 | 第16-17页 |
| 3 生防菌的拮抗物质合成 | 第17-19页 |
| ·核糖体合成途径 | 第17-18页 |
| ·非核糖体合成途径 | 第18-19页 |
| 4 拮抗物质生物合成的影响因素 | 第19-21页 |
| ·影响拮抗基因表达的转录调控因子 | 第19-20页 |
| ·影响拮抗物质生物合成的环境因子 | 第20-21页 |
| 5 生防菌基因改良研究进展 | 第21-24页 |
| ·导入外源拮抗基因 | 第21-22页 |
| ·提高抗生素表达量 | 第22-24页 |
| ·结构基因突变重组合成新型抗生素 | 第24页 |
| 6 芽孢杆菌基因操作研究进展 | 第24-27页 |
| ·DNA高效整合系统 | 第25-26页 |
| ·DNA高效删除系统 | 第26-27页 |
| ·反向筛选系统 | 第27页 |
| 7 本文研究目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 芽孢杆菌染色体编辑系统的建立 | 第29-47页 |
| 1 材料与方法 | 第30-37页 |
| ·菌株,质粒和引物 | 第30-32页 |
| ·培养基和培养条件 | 第32-33页 |
| ·DNA操作 | 第33页 |
| ·电转化方法 | 第33页 |
| ·温度敏感载体pWY121的构建 | 第33-34页 |
| ·敲除质粒pQRBL的构建 | 第34-35页 |
| ·单链DNA制备 | 第35-36页 |
| ·基因敲除 | 第36页 |
| ·细胞活力测定 | 第36-37页 |
| ·突变体检测 | 第37页 |
| ·生物测试 | 第37页 |
| 2 结果和分析 | 第37-44页 |
| ·电转化条件优化 | 第37-38页 |
| ·芽孢杆菌染色体编辑系统原理 | 第38-39页 |
| ·标记清除元件的构建 | 第39-40页 |
| ·基因abrB和基因簇myc的敲除 | 第40-43页 |
| ·生物测试 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 影响枯草芽孢杆菌表达mycosubtilin的信息素ComX合成基因comX的克隆与表达 | 第47-57页 |
| 1 材料和方法 | 第47-51页 |
| ·菌株,质粒和引物 | 第47-48页 |
| ·DNA的提取和操作 | 第48-49页 |
| ·指示菌株构建 | 第49-50页 |
| ·染色体文库构建与筛选 | 第50页 |
| ·疑似基因敲除 | 第50页 |
| ·疑似基因表达 | 第50页 |
| ·生物试验 | 第50-51页 |
| 2 结果和分析 | 第51-54页 |
| ·指示菌株B.subtilis ATCC 6633/pMyc-lacZ的构建 | 第51页 |
| ·ATCC 6633染色体文库构建与筛选 | 第51-53页 |
| ·Cos-Blue上comX基因敲除 | 第53页 |
| ·ComX在pET系统中的表达与功能验证 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第四章 多粘类芽孢杆菌SQR21抗真菌物质的基因研究 | 第57-79页 |
| 第一节 多粘类芽孢杆菌SQR21抗真菌物质的分离纯化及鉴定 | 第58-61页 |
| 1 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·菌株 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58页 |
| ·抑菌物质的提取 | 第58页 |
| ·抑菌物质的分离纯化与鉴定 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-60页 |
| ·抑菌物质的HPLC分离 | 第59页 |
| ·抗真菌物质的结构鉴定 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 第二节 多粘类芽孢杆菌SQR21 fusaricidin基因簇的鉴定 | 第61-71页 |
| 1 材料和方法 | 第63-65页 |
| ·菌株和质粒 | 第63页 |
| ·培养基和培养条件 | 第63页 |
| ·分子生物学操作 | 第63页 |
| ·转座突变 | 第63-64页 |
| ·电击转化 | 第64-65页 |
| ·生物测试 | 第65页 |
| ·Fusaricidin提取 | 第65页 |
| ·Fusaricidin的HPLC分析 | 第65页 |
| ·Fusaricidin的结构分析 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-69页 |
| ·突变体筛选 | 第65-66页 |
| ·代谢产物分析 | 第66-67页 |
| ·转座子插入位点序列鉴定 | 第67-68页 |
| ·基因组扫描与结构域分析 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 第三节 AbrB对多粘类芽孢杆菌SQR21产fusaricidins的影响 | 第71-79页 |
| 1 材料和方法 | 第71-73页 |
| ·菌株,质粒和引物 | 第71-72页 |
| ·DNA的提取和操作 | 第72页 |
| ·AbrB的表达及提取 | 第72页 |
| ·Pfus-lacZ报告载体构建 | 第72页 |
| ·凝胶阻滞电泳 | 第72页 |
| ·基因abrB的敲除 | 第72-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-76页 |
| ·AbrB的表达与提取 | 第73页 |
| ·AbrB对Pfus-lacZ表达的影响 | 第73-74页 |
| ·凝胶阻滞电泳分析 | 第74-75页 |
| ·染色体编辑系统对abrB的敲除 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-77页 |
| 4 本章小结 | 第77-79页 |
| 第五章 产绿链霉菌laspartomycin生物合成基因簇的分子克隆及鉴定 | 第79-97页 |
| 1 材料与方法 | 第80-84页 |
| ·菌株、质粒和cosmid及其培养条件 | 第80-81页 |
| ·DNA的提取和操作 | 第81页 |
| ·非核糖体肽合成酶基因探针的制备 | 第81页 |
| ·产绿链霉菌ATCC 29814的基因组全扫描 | 第81页 |
| ·产绿链霉菌ATCC 29814转化系统的开发 | 第81-82页 |
| ·产绿链霉菌ATCC 29814染色体上NRPS基因lpmC的敲除 | 第82页 |
| ·产绿链霉菌ATCC 29814全基因组cosmid文库的构建与筛选 | 第82-83页 |
| ·laspartomycin合成的HPLC分析 | 第83页 |
| ·产绿链霉菌ATCC 29814和突变体SvlpmCmtPS7产物的MALDI-TOF MS分析及生物测试 | 第83页 |
| ·Southern杂交 | 第83页 |
| ·测序和序列分析 | 第83-84页 |
| ·GenBank登录号 | 第84页 |
| 2 结果和分析 | 第84-94页 |
| ·S.viridochromogenes ATCC 29814转化系统的建立 | 第84页 |
| ·Laspartomycin肽合成酶(PS)基因探针的克隆 | 第84页 |
| ·基因组扫描鉴定laspartomycin生物合成基因簇 | 第84-85页 |
| ·Laspartomycin NRPS基因lpmC的失活 | 第85页 |
| ·野生型菌株ATCC29814和突变体SvlpmCmtPS7代谢产物的分析及生物测试 | 第85-87页 |
| ·确定含有lpm基因簇重叠序列的cosmid集合 | 第87页 |
| ·lpm基因簇的全面分析 | 第87-88页 |
| ·肽链骨架的酶学组建 | 第88-91页 |
| ·非蛋白氨基酸的生物合成 | 第91-92页 |
| ·脂肪酸链的形成和连接 | 第92-93页 |
| ·自身抗性基因,调控基因和输出基因 | 第93-94页 |
| ·基因簇的边界确定 | 第94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| 4 本章小结 | 第96-97页 |
| 全文总结 | 第97-99页 |
| 1 全文总结 | 第97-98页 |
| 2 本论文创新点 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-125页 |
| 附录 | 第125-141页 |
| 在读期间发表的论文 | 第141-143页 |
| 致谢 | 第143页 |
