| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·盾叶薯蓣简介 | 第12-13页 |
| ·基本生物学特性 | 第12页 |
| ·盾叶薯蓣地理分布情况 | 第12-13页 |
| ·盾叶薯蓣主要的应用价值——薯蓣皂甙元的重要来源 | 第13-14页 |
| ·盾叶薯蓣育种改良的研究进展 | 第14-16页 |
| ·薯蓣皂甙元的生物合成研究进展 | 第16-21页 |
| ·植物胆固醇是薯蓣皂甙元生物合成的前体物质 | 第16页 |
| ·环阿屯醇合酶(CAS)在植物甾醇合成中的重要作用 | 第16-18页 |
| ·甾醇C24甲基转移酶(SMT)在植物甾醇合成中的重要作用 | 第18-21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 盾叶薯蓣SMT基因cDNA的克隆及序列分析 | 第22-42页 |
| ·试验材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株与载体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·溶液 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-32页 |
| ·盾叶薯蓣总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·mRNA的反转录 | 第25页 |
| ·简并引物设计及合成 | 第25-26页 |
| ·cDNA核心片段的克隆和测序 | 第26-29页 |
| ·基因特异引物的设计及合成 | 第29-30页 |
| ·快速扩增cDNA末端(RACE) | 第30-32页 |
| ·cDNA全长序列分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-41页 |
| ·盾叶薯蓣总RNA的提取与检测 | 第32-33页 |
| ·cDNA核心片段的扩增 | 第33页 |
| ·SMT1基因全长cDNA和SMT2基因cDNA片段扩增及序列分析 | 第33-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 盾叶薯蓣SMT基因表达差异分析 | 第42-59页 |
| ·试验材料 | 第42页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-47页 |
| ·盾叶薯蓣不同器官总RNA的提取 | 第42页 |
| ·mRNA的反转录 | 第42页 |
| ·内参基因简并引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| ·内参基因cDNA片段的克隆和序列分析 | 第43-44页 |
| ·实时定量PCR引物的设计与合成 | 第44-45页 |
| ·实时定量PCR反应 | 第45页 |
| ·实时定量PCR引物扩增效率及特异性分析 | 第45-46页 |
| ·四个内参基因稳定性分析 | 第46-47页 |
| ·不同器官中SMT基因mRNA水平表达差异分析 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-57页 |
| ·不同器官总RNA的提取与检测 | 第47页 |
| ·内参基因cDNA片段的克隆 | 第47-49页 |
| ·实时定量PCR引物扩增效率及特异性分析 | 第49-55页 |
| ·四个内参基因稳定性分析 | 第55页 |
| ·不同器官中SMT基因mRNA水平表达差异分析 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 第四章 盾叶薯蓣SMT1基因反义和干扰载体的构建以及转基因植株的培育 | 第59-76页 |
| ·试验材料 | 第59-61页 |
| ·植物材料 | 第59页 |
| ·菌株与载体 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·培养条件 | 第61页 |
| ·试验方法 | 第61-68页 |
| ·SMT1基因开放阅读框序列的克隆 | 第61-62页 |
| ·SMT1基因反义表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·人工小分子RNA的设计及其人工前体的克隆 | 第63-66页 |
| ·SMT1基因RNAi载体的构建 | 第66页 |
| ·反义及RNAi载体转化根癌农杆菌 | 第66-67页 |
| ·根癌农杆菌介导盾叶薯蓣的遗传转化 | 第67-68页 |
| ·转基因植株GUS组织化学染色法鉴定 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-74页 |
| ·SMT1基因开放阅读框的克隆 | 第68-69页 |
| ·反义表达载体的验证 | 第69-70页 |
| ·人工小分子RNA前体的克隆 | 第70页 |
| ·RNAi载体的验证 | 第70-73页 |
| ·盾叶薯蓣愈伤组织的诱导与培养 | 第73页 |
| ·转基因植株的再生 | 第73页 |
| ·转基因植株GUS组织化学染色法的鉴定 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
