| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 符号说明 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-31页 |
| 1.鞘脂及其代谢 | 第21-25页 |
| ·神经酰胺与细胞凋亡 | 第22-23页 |
| ·鞘氨醇激酶及其产物鞘氨醇磷酸与癌症的发生密切相关 | 第23-25页 |
| 2.维甲酸信号通路 | 第25-29页 |
| ·RXRα能进入细胞质中发挥重要的作用 | 第27-28页 |
| ·癌症的发生与维甲酸信号通路的异常有关 | 第28-29页 |
| 3.鞘脂代谢产物参与调控维甲酸信号通路 | 第29-31页 |
| 第一部分 神经酰胺引起RXRα出核的意义 | 第31-48页 |
| 1.材料 | 第31-35页 |
| ·化合物 | 第31页 |
| ·细胞株 | 第31页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·质粒 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·试剂配制 | 第32-35页 |
| 2. 实验方法 | 第35-40页 |
| ·大肠杆菌的转化(CaCl_2法) | 第35页 |
| ·质粒提取(用QIAGEN试剂盒) | 第35页 |
| ·C2GFP-RXRα稳定表达细胞系的建立 | 第35-36页 |
| ·免疫荧光染色 | 第36页 |
| ·细胞凋亡分析(Hochest33258染色) | 第36页 |
| ·瞬时转染 | 第36-37页 |
| ·细胞增殖分析(MTT法) | 第37页 |
| ·转录活性调控分析(荧光素酶报告基因检测法) | 第37-38页 |
| ·Western blotting | 第38页 |
| ·细胞核质分离 | 第38-39页 |
| ·数据处理 | 第39-40页 |
| 3.实验结果 | 第40-46页 |
| ·在Cer引起的细胞凋亡过程中RXRα有出核的现象 | 第40-42页 |
| ·Cer没有影响RXRα/RARβ对靶基因的转录 | 第42-43页 |
| ·Cer对细胞生长的抑制与RXRα的表达量无关 | 第43-44页 |
| ·RXRα出核可能是与凋亡引起的蛋白降解有关 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第二部分 S1P引起肿瘤细胞对维甲酸类药物耐药的机制研究 | 第48-75页 |
| 1. 材料 | 第48-49页 |
| ·化合物 | 第48页 |
| ·细胞株 | 第48页 |
| ·质粒 | 第48页 |
| ·抗体 | 第48页 |
| ·试剂盒 | 第48页 |
| ·其他重要试剂 | 第48-49页 |
| 2. 实验方法 | 第49-55页 |
| ·半定量RT-PCR | 第49-51页 |
| ·实时定量PCR | 第51页 |
| ·转录活性调控分析(荧光素酶报告基因检测法) | 第51-52页 |
| ·外源性表达Sphk2对ATRA和LGD诱导的RARβ表达的影响 | 第52-53页 |
| ·免疫共沉淀 | 第53页 |
| ·TPA对Sphk2与C2GFP-RXRα胞内定位的影响 | 第53-54页 |
| ·细胞周期分析 | 第54页 |
| ·其他实验方法同第一部分 | 第54页 |
| ·数据处理 | 第54-55页 |
| 3. 实验结果 | 第55-72页 |
| ·低浓度的S1P促进细胞生长而高浓度产生抑制作用 | 第55-56页 |
| ·S1P拮抗ATRA抑制细胞生长的作用 | 第56-58页 |
| ·S1P能拮抗LGD1069抑制细胞生长的作用 | 第58-59页 |
| ·S1P解除了ATRA引起的HT-29细胞G1期阻滞 | 第59-60页 |
| ·ATRA促进RARβ转录和表达的作用能被S1P拮抗 | 第60-61页 |
| ·S1P拮抗ATRA对含有维甲酸反应元件的基因的转录 | 第61-62页 |
| ·Sphk2的胞内分布与RXRα有一致性 | 第62-64页 |
| ·外源性表达的Sphk2能拮抗维甲酸类药物诱导的RARβ的表达 | 第64-66页 |
| ·蛋白酶体抑制剂MG132能阻断S1P的拮抗作用 | 第66-68页 |
| ·S1P可促进RXRα受体配体依赖性降解 | 第68-69页 |
| ·S1P促进了RARβ的修饰和降解 | 第69-70页 |
| ·S1P拮抗维甲酸类药物促进靶基因转录作用的设想 | 第70-72页 |
| 4. 讨论 | 第72-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第85-86页 |
| 附件 | 第86-94页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第94页 |
