| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第7-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第7-8页 |
| ·酵母N-糖基化途径 | 第8-10页 |
| ·酵母N-糖基人源化改造途径和研究进展 | 第10-12页 |
| ·粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF） | 第12页 |
| ·本课题的研究背景及研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-26页 |
| ·材料 | 第14-16页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·工具酶、抗体 | 第14页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·主要溶液 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-26页 |
| ·P. pastoris X-33 URA3 基因同源置换片段的构建 | 第16-17页 |
| ·P. pastoris X-33 OCH1 基因敲除质粒的构建和鉴定 | 第17-21页 |
| ·敲除P. pastoris X-33 的URA3 基因 | 第21-22页 |
| ·URA3 基因敲除菌株的鉴定 | 第22页 |
| ·敲除P. pastoris X-33 的OCH1 基因 | 第22页 |
| ·OCH1 基因敲除菌株的鉴定 | 第22-23页 |
| ·OCH1 基因敲除菌株的细胞形态和生长情况 | 第23页 |
| ·表达载体pPICZaA/GM-CSF 的构建 | 第23-24页 |
| ·GM-CSF 在毕赤酵母X-33（och1-）和X-33 中的表达 | 第24-25页 |
| ·Western blot 检测 | 第25页 |
| ·GM-CSF 蛋白的纯化和N-糖苷酶F (PNGaseF)酶切分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-40页 |
| ·结果 | 第26-38页 |
| ·URA3 基因同源置换片段的构建和鉴定 | 第26页 |
| ·OCH1 基因敲除质粒的构建和鉴定 | 第26-28页 |
| ·URA3 基因敲除菌株的构建和鉴定 | 第28-30页 |
| ·OCH1 基因敲除菌株的构建和鉴定 | 第30-31页 |
| ·OCH1 基因敲除菌株的细胞形态和生长情况 | 第31-32页 |
| ·表达载体pPICZaA/GM-CSF 的鉴定 | 第32-34页 |
| ·GM-CSF 表达菌株的鉴定 | 第34页 |
| ·GM-CSF 蛋白的表达 | 第34-36页 |
| ·Western blot 检测 | 第36页 |
| ·GM-CSF 蛋白的纯化和N-糖苷酶F (PNGaseF)酶切分析 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 结论与展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
