| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-16页 |
| ·人类凝血因子Ⅶ及其凝血功能 | 第9-10页 |
| ·凝血因子Ⅶ与相关疾病 | 第10-11页 |
| ·凝血因子Ⅶ制品 | 第11-13页 |
| ·ACTB基因的研究进展 | 第13-14页 |
| ·生物药物的表达系统 | 第14-15页 |
| ·本研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 第2章 基因抓捕法构建hACTB-hFⅦ杂合基因座 | 第16-40页 |
| ·引言 | 第16-17页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·载体和菌种 | 第17页 |
| ·试剂盒、工具酶及其他材料 | 第17页 |
| ·引物 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-33页 |
| ·质粒提取(东盛试剂盒碱裂解法提取小量细菌质粒DNA) | 第20-21页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第21页 |
| ·DNA片段纯化(TAKARA试剂盒) | 第21-22页 |
| ·凝胶回收(QIAGEN试剂盒) | 第22-23页 |
| ·线性化载体与插入片段的连接反应 | 第23页 |
| ·连接产物或质粒的转化 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆的鉴定方法 | 第24页 |
| ·构建基因抓捕载体 | 第24-28页 |
| ·制备化学感受态细胞（氯化耗法） | 第28页 |
| ·制备电击感受态细胞(L-阿拉伯糖诱导法) | 第28-29页 |
| ·连续三次法基因抓捕 | 第29-33页 |
| ·结果 | 第33-38页 |
| ·基因抓捕载体构建过程的鉴定 | 第33-36页 |
| ·连续三次基因抓捕 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第3章 hACTB-hFⅦ杂合基因座在HEK293细胞中表达的鉴定 | 第40-55页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·实验细胞 | 第40页 |
| ·工具酶、试剂盒及其他材料 | 第40页 |
| ·引物 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-49页 |
| ·重组质粒的大量抽提(QIAGENE试剂盒) | 第42-43页 |
| ·细胞转染片段DNA的处理 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第44-46页 |
| ·杂合基因座hACTB-hFⅦ在HEK293细胞中表达的鉴定 | 第46-49页 |
| ·结果 | 第49-51页 |
| ·转染细胞中杂合基因座hACTB-hFⅦ的PCR鉴定 | 第49页 |
| ·转染细胞中杂合基因座hACTB-hFⅦ的RT-PCR鉴定 | 第49-50页 |
| ·阳性细胞中人类凝血因子Ⅶ表达量的测定 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第64页 |
