| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-31页 |
| ·蛋白质折叠 | 第13-15页 |
| ·蛋白质折叠研究的概况与意义 | 第13-14页 |
| ·蛋白质的体内折叠 | 第14-15页 |
| ·肽酰脯氨酰顺反异构酶 | 第15-24页 |
| ·肽酰脯氨酰顺反异构酶概述 | 第15-16页 |
| ·脯氨酰顺反异构酶家族 | 第16-17页 |
| ·蛋白质折叠中肽酰脯氨酰顺反异构酶的作用 | 第17-18页 |
| ·PPI 的酶学机理 | 第18-20页 |
| ·脯氨酰顺反异构酶既是折叠酶又是分子伴侣 | 第20-22页 |
| ·分子伴侣的定义 | 第21页 |
| ·分子伴侣概述 | 第21页 |
| ·分子伴侣家族的分类和性质 | 第21-22页 |
| ·研究蛋白质分子伴侣功能的理想模型 | 第22页 |
| ·分子伴侣研究当中的一些思考 | 第22页 |
| ·脯氨酰顺反异构酶的其它功能 | 第22-24页 |
| ·肽酰脯氨酰顺反异构酶在植物中的研究 | 第24-25页 |
| ·植物中 parvulins 类型 PPI 的研究进展 | 第24页 |
| ·植物中 parvulins 的功能 | 第24-25页 |
| ·研究蛋白质活性位点的方法 | 第25-28页 |
| ·蛋白质的化学修饰概述 | 第25-26页 |
| ·蛋白质侧链基团各种氨基酸残基的修饰反应 | 第26-27页 |
| ·蛋白质的定点突变 | 第27-28页 |
| ·分子对接模拟酶与底物的结合方式 | 第28-30页 |
| ·分子对接 | 第28页 |
| ·受体结构分子的准备 | 第28-29页 |
| ·分子对接运算 | 第29-30页 |
| ·本研究的目的意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-44页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·cDNA 文库 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第31页 |
| ·主要实验仪器 | 第31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32-35页 |
| ·实验相关溶液的配制 | 第32-34页 |
| ·碱裂解法提取质粒相关溶液的配制 | 第32-33页 |
| ·蛋白含量测定相关溶液的配制 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 缓冲液的配制 | 第33-34页 |
| ·DTNB 法测定半胱氨酸含量相关溶液的配制 | 第34页 |
| ·感受态制备相关试剂的配制 | 第34页 |
| ·培养基的配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-44页 |
| ·GhPPI 基因的扩增、克隆及序列测定 | 第35-39页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·GhPPI 基因的 PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·GhPPI 基因 PCR 扩增产物的回收 | 第36页 |
| ·回收产物与 pMD18-T simple 载体连接 | 第36页 |
| ·感受态大肠杆菌 DH5α的制备 | 第36-37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第37-39页 |
| ·DNA 序列测定 | 第39页 |
| ·棉花 GhPPI 的活性分析 | 第39-42页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第41页 |
| ·聚丙烯凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第41-42页 |
| ·原核表达 GhPPI 的纯化 | 第42-43页 |
| ·粗酶液的制取 | 第42页 |
| ·亲和层析纯化 | 第42-43页 |
| ·GhPPI 蛋白质的修饰 | 第43页 |
| ·GhPPI 蛋白纯度的鉴定及分子量测定 | 第43页 |
| ·兔肌肌酸激酶酶活性测定 | 第43-44页 |
| ·兔肌肌酸激酶的分离纯化 | 第43页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-65页 |
| ·氨基酸序列同源性分析表明 AY972810 属于 PPI 中的 parvulins 家族 | 第44-45页 |
| ·棉花 GhPPI 的碱基及其编码的氨基酸序列 | 第44页 |
| ·氨基酸序列同源性分析 | 第44-45页 |
| ·同源蛋白聚类分析表明 GhPPI 与 AtPin2、LjPar2 进化距离比较近 | 第45-48页 |
| ·GhPPI 原核表达产物的 PPI 酶活性测定 | 第48-53页 |
| ·棉花 GhPPI 基因的扩增及序列测定 | 第48-49页 |
| ·棉花 GhPPI 基因的 PCR 扩增 | 第48页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及序列测定 | 第49页 |
| ·棉花盐胁迫筛选基因的原核表达、纯化及 PPI 活性测定 | 第49-53页 |
| ·GhPPI 原核表达载体的构建和鉴定 | 第49-50页 |
| ·GhPPI 的原核表达 | 第50页 |
| ·GhPPI 蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·GhPPI 的 PPI 活性分析 | 第51-53页 |
| ·棉花 GhPPI 活性位点及其必需氨基酸的预测 | 第53-56页 |
| ·同源建模预测 GhPPI 的活性必需氨基酸 | 第53-54页 |
| ·分子对接的方法推测 GhPPI 的活性必需氨基酸 | 第54-56页 |
| ·化学修饰和定点突变的方法确定 GhPPI 的活性必需氨基酸 | 第56-61页 |
| ·化学修饰法初步确定 GhPPI 的活性必需氨基酸 | 第56-57页 |
| ·定点突变法确定 GhPPI 的活性必需氨基酸 | 第57-61页 |
| ·GhPPI 突变质粒的获得 | 第57-59页 |
| ·GhPPI 突变体的原核表达及纯化 | 第59-60页 |
| ·突变 GhPPI 的活性测定 | 第60-61页 |
| ·突变 GhPPI 的内源荧光光谱 | 第61页 |
| ·棉花 GhPPI 在体外具有分子伴侣活性 | 第61-65页 |
| ·兔肌肌酸激酶的分离纯化 | 第62页 |
| ·棉花 GhPPI 的分子伴侣活性 | 第62-63页 |
| ·突变 GhPPI 的分子伴侣活性 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第80页 |
