| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·血管新生生长因子/调节因子 | 第11-13页 |
| ·血管内皮生长因子和受体（VEGF/VEGFR）家族 | 第11页 |
| ·促血管生成素（Angiopoietins, Ang）及Tie-receptors | 第11页 |
| ·神经粘连因子（Neuropilins, NP） | 第11-12页 |
| ·硫酸肝素糖蛋白（HSPG） | 第12页 |
| ·成纤维生长因子（FGF） | 第12页 |
| ·血小板生长因子（Platelet-derived growth factors, PDGF） | 第12-13页 |
| ·转化生长因子-β(TGF-β) | 第13页 |
| ·Ephrins 和Ephs | 第13页 |
| ·肿瘤血管新生与内源性血管新生抑制剂 | 第13-19页 |
| ·肿瘤血管新生 | 第13-14页 |
| ·肿瘤血管的特点 | 第14-15页 |
| ·基底膜来源的血管新生抑制剂 | 第15-17页 |
| ·富含组氨酸结构域蛋白与血管新生抑制 | 第17-19页 |
| ·细胞迁移的信号传导 | 第19-22页 |
| ·整合素（Integrins） | 第19-20页 |
| ·黏着斑激酶（Focal adhesion kinase，FAK) | 第20-21页 |
| ·桩蛋白（Paxillin） | 第21页 |
| ·整合素连接激酶（Integrin-linked kinase，ILK) | 第21-22页 |
| 第二章 野生型Lj-RGD3 的生物信息学分析 | 第22-27页 |
| ·数据库与软件 | 第22页 |
| ·方法 | 第22页 |
| ·一级结构分析 | 第22页 |
| ·二级结构预测 | 第22页 |
| ·同源序列比对 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-26页 |
| ·野生型Lj-RGD3 一级结构分析 | 第22-23页 |
| ·野生型Lj-RGD3 信号肽分析及其二级结构 | 第23-24页 |
| ·野生型Lj-RGD3 同源性比对结果 | 第24-26页 |
| ·结论 | 第26-27页 |
| 第三章 野生型rLj-RGD3 及其突变体rLj-113、rLj-114、rLj-115、rLj-116 的基因合成与蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第27-39页 |
| ·材料、试剂 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·合成目的基因片段 | 第27页 |
| ·目的基因质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳[74] | 第28页 |
| ·重组质粒转化至E.coli BL21 表达菌中[74] | 第28-29页 |
| ·对突变体菌进行不同时间和温度梯度的IPTG 诱导 | 第29页 |
| ·五种突变体蛋白的表达及提纯 | 第29-30页 |
| ·Tricine-SDS PAGE[75]电泳 | 第30-31页 |
| ·采用考马斯亮蓝G-250 法对纯化的蛋白浓度进行测定 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-38页 |
| ·野生型 Lj-RGD3 的蛋白序列比对分析,突变体 Lj-112、Lj-113、Lj-114、Lj-115 以及 Lj-116 的 cDNA 序列合成及其推导的氨基酸序列 | 第31-34页 |
| ·目的基因质粒的提取及表达菌的转化 | 第34页 |
| ·对Lj-RGD3 及其突变体表达菌进行不同时间和温度梯度的IPTG 诱导表达 | 第34-37页 |
| ·基因重组蛋白 rLj-RGD3、rLj-112、rLj-113、rLj-114、rLj-115 以及 rLj-116 的纯化及鉴定 | 第37页 |
| ·蛋白标准曲线的绘制及蛋白质浓度的测定 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·结论 | 第38-39页 |
| 第四章 野生型 rLj-RGD3 及其突变体 rLj-112 、rLj-113、rLj-114、 rLj-115、 rLj-116 抗血管新生的活性及部分机制的研究 | 第39-52页 |
| ·材料、试剂 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·细胞培养 | 第39页 |
| ·细胞增殖实验 | 第39-40页 |
| ·人整合素酶联免疫分析 | 第40-41页 |
| ·ECV304 细胞的迁移实验 | 第41页 |
| ·ECV304 细胞的浸润实验 | 第41-42页 |
| ·rLj-RGD3 及其五种突变体蛋白对血管新生的抑制作用 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-50页 |
| ·对bFGF 诱导的ECV304 细胞增殖的抑制作用 | 第43-45页 |
| ·对bFGF 诱导的鸡绒毛尿囊膜（CAM）血管新生的抑制作用 | 第45-46页 |
| ·ECV304 细胞的迁移实验 | 第46-48页 |
| ·ECV304 细胞的浸润实验 | 第48页 |
| ·ELISA 法测定野生型 rLj-RGD3 及突变体 rLj-112、rLj-113、rLj-114、rLj-115、 rLj-116 对整合素连接激酶(ILK-1)表达的影响 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 本论文的创新点 | 第53页 |
| 进一步需要研究的问题 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
