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奶山羊雄性生殖干细胞的分离培养及向精子细胞的诱导分化

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
文献综述第12-24页
 第一章 哺乳动物雄性生殖干细胞及其研究进展第12-24页
   ·雄性生殖干细胞的起源第12-13页
   ·雄性生殖干细胞的生物学特性和鉴定第13-15页
     ·形态学和组织学特征第13页
     ·雄性生殖干细胞的特异性标记第13-15页
   ·雄性生殖干细胞的体外培养第15-18页
     ·雄性生殖干细胞的分离、纯化第15-16页
       ·分离、纯化雄性生殖干细胞时材料的选择第15页
       ·雄性生殖干细胞悬液的制备第15-16页
     ·雄性生殖干细胞的纯化第16-17页
       ·差速贴壁法第16页
       ·Percoll 密度梯度离心第16页
       ·流式细胞术( Flow cytomet ry, FCM)第16-17页
       ·免疫磁珠分离技术(MACS)第17页
     ·培养液成分的改进与发展第17-18页
       ·干细胞生长因子(SCF)第17页
       ·胶质细胞源神经营养因子(GDNF)第17-18页
       ·白血病抑制因子(LIF)第18页
       ·成纤维细胞生长因子(FGFs)第18页
     ·饲养层第18页
   ·雄性生殖干细胞的诱导分化第18-19页
   ·雄性生殖干细胞的去分化及多能性第19-21页
   ·雄性生殖干细胞移植的研究进展第21-22页
     ·雄性生殖干细胞移植第21-22页
       ·雄性生殖干细胞移植的流程第21页
       ·受体动物的选择第21-22页
       ·供体细胞的获得与体外操作第22页
       ·移植方法第22页
   ·奶山羊雄性生殖干细胞的研究进展第22页
   ·雄性生殖干细胞研究的前景第22-24页
试验研究第24-50页
 第二章 奶山羊雄性生殖干细胞分离、培养条件的优化第24-34页
   ·材料和方法第24-27页
     ·材料第24-25页
       ·动物组织材料第24页
       ·主要试剂第24-25页
       ·主要仪器设备第25页
     ·方法第25-27页
       ·奶山羊睾丸组织的采集第25页
       ·不同组合的酶消化液的效果比较第25-26页
       ·不同细胞外基质对雄性生殖干细胞纯化的效率第26页
       ·CD49f 的免疫荧光染色第26页
       ·碱性磷酸酶(AP)染色第26页
       ·奶山羊年龄对于雄性生殖干细胞培养的影响第26页
       ·不同基础培养液对奶山羊雄性生殖干细胞培养的影响第26-27页
       ·生长因子及小分子化和物对奶山羊雄性生殖干细胞体外增殖、分化的作用第27页
       ·数据统计方法第27页
   ·结果第27-30页
     ·三种酶消化法的比较第27页
     ·细胞外基质对奶山羊雄性生殖干细胞的纯化效率的影响第27页
     ·不同基础液对于奶山羊雄性生殖干细胞培养的影响第27-28页
     ·年龄对奶山羊雄性生殖干细胞培养的影响第28-29页
     ·生长因子及小分子化合物对奶山羊雄性生殖干细胞体外增殖、分化的作用第29-30页
   ·讨论第30-32页
   ·小结第32-34页
 第三章 奶山羊雄性生殖干细胞生物学特性的鉴定第34-41页
   ·材料和方法第34-36页
     ·材料第34页
       ·动物组织材料第34页
       ·主要试剂第34页
       ·主要仪器第34页
     ·方法第34-36页
       ·奶山羊雄性生殖干细胞的获取第34-35页
       ·奶山羊雄性生殖干细胞株的免疫荧光检测第35页
       ·奶山羊雄性生殖干细胞株的RT-PCR 检测第35-36页
       ·奶山羊雄性生殖干细胞的体外诱导分化第36页
   ·结果第36-37页
     ·奶山羊雄性生殖干细胞的形态学观察第36-37页
     ·奶山羊雄性生殖干细胞的免疫荧光检测第37页
     ·奶山羊雄性生殖干细胞的RT-PCR 检测第37页
     ·奶山羊雄性生殖干细胞的体外分化潜能第37页
   ·讨论第37-39页
   ·小结第39-41页
 第四章 奶山羊雄性GSCs 向精子细胞的诱导分化第41-50页
   ·材料和方法第41-43页
     ·材料第41页
       ·主要试剂第41页
       ·主要仪器第41页
     ·方法第41-43页
       ·睾丸提取液的制作第42页
       ·奶山羊雄性生殖干细胞的体外诱导第42页
       ·Stra8 超表达对奶山羊雄性生殖干细胞向精子细胞分化的影响第42页
       ·定量PCR第42页
       ·免疫荧光染色第42-43页
   ·结果第43-45页
     ·RA 及睾丸提取液的作用第43页
     ·Stra8 基因对于奶山羊雄性生殖干细胞分化为精子细胞的作用第43-45页
   ·讨论第45-49页
   ·小结第49-50页
结论第50页
本研究的创新点与进一步研究的课题第50-51页
参考文献第51-59页
缩略语简表第59-60页
致谢第60-61页
作者简介第61页

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