| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-30页 |
| 一 单克隆抗体及其在植物病毒学中的应用 | 第10-21页 |
| 1 抗体的基本结构和特性 | 第10-12页 |
| 2 单克隆抗体制备技术 | 第12-15页 |
| ·杂交瘤技术基本原理 | 第12-13页 |
| ·杂交瘤技术基本流程 | 第13页 |
| ·单克隆抗体技术的发展 | 第13-15页 |
| ·融合技术的改进 | 第13页 |
| ·人—人杂交瘤技术和杂交—杂交瘤技术的发展 | 第13-14页 |
| ·单链抗体技术发展 | 第14-15页 |
| 3 单克隆抗体在植物病毒学中的应用 | 第15-19页 |
| ·病害诊断和检测 | 第16页 |
| ·病毒株系鉴定及分离物分型 | 第16页 |
| ·病毒蛋白抗原结构分析 | 第16-17页 |
| ·作为探针分析病毒基因产物的功能 | 第17-19页 |
| 4 植物病毒学中常用的免疫检测方法 | 第19-21页 |
| ·沉淀法 | 第19页 |
| ·酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) | 第19-20页 |
| ·免疫印迹检测(Immunoblotting assays) | 第20页 |
| ·免疫胶体金技术(immuno-colloidal gold technology) | 第20页 |
| ·免疫捕获反转录PCR(Immunocapture reverse transcript PCR) | 第20-21页 |
| 二 双生病毒的研究进展 | 第21-30页 |
| 1 双生病毒的分类、基因组结构及寄主范围 | 第22-25页 |
| ·Mastrevirus | 第22页 |
| ·Curtovirus | 第22页 |
| ·Topocuvirus | 第22-23页 |
| ·Begomovirus | 第23-24页 |
| ·双生病毒种的划分标准 | 第24-25页 |
| 2 双生病毒的复制与转录 | 第25-26页 |
| ·双生病毒的复制 | 第25-26页 |
| ·双生病毒的转录 | 第26页 |
| 3 DNAβ的发现和它在双生病毒致病性中的作用 | 第26-30页 |
| ·DNAβ的发现及其特征 | 第26-27页 |
| ·DNAβ在双生病毒致病性中的作用 | 第27-28页 |
| ·DNAβ卫星分子编码的βC1蛋白 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-41页 |
| 1 材料 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·试剂与仪器 | 第30页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-41页 |
| ·PCR技术 | 第30-31页 |
| ·普通PCR反应 | 第30-31页 |
| ·PCR产物纯化 | 第31页 |
| ·DNA克隆技术 | 第31-33页 |
| ·连接 | 第31-32页 |
| ·DNA末端去磷酸化 | 第32页 |
| ·感受态细胞制备 | 第32页 |
| ·转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第33-34页 |
| ·质粒微量提取试剂盒 | 第33页 |
| ·PCR鉴定 | 第33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达及蛋白纯化 | 第34-36页 |
| ·诱导表达 | 第34页 |
| ·表达产物在变性条件下的纯化 | 第34页 |
| ·三氯乙酸(TCA)除去盐酸胍 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE | 第34-35页 |
| ·电转移 | 第35页 |
| ·Western印迹分析 | 第35-36页 |
| ·多克隆与单克隆抗体的制备及检测方法 | 第36-41页 |
| ·多抗血清的制备 | 第36-37页 |
| ·单克隆抗体制备 | 第37-39页 |
| ·免疫胶体金标记技术 | 第39-41页 |
| 第三章 研究内容 | 第41-56页 |
| 1 前言 | 第41页 |
| 2 材料和方法 | 第41-44页 |
| ·菌株、质粒、毒源、植物材料及试剂 | 第41-42页 |
| ·DNAβ分子βC1基因的克隆和原核表达载体构建 | 第42页 |
| ·诱导表达和蛋白纯化 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第43页 |
| ·抗βC1蛋白的单克隆抗体制备 | 第43页 |
| ·间接ELISA | 第43页 |
| ·单隆抗体的效价测定 | 第43页 |
| ·检测灵敏度测定 | 第43-44页 |
| ·Western blot印迹分析 | 第44页 |
| ·三抗体夹心ELISA检测发病植物中的βC1蛋白 | 第44页 |
| ·Y10 βC1、Y35 βC1蛋白的免疫胶体金标记 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-52页 |
| ·TYLCCNV-Y10和TbCSV-Y35卫星DNAβ分子βC1基因在大肠杆菌中的表达 | 第44-47页 |
| ·βC1基因的克隆及表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·βC1基因在大肠杆菌中的表达 | 第45页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·Y10 βC1和Y35 βC1的单克隆抗体制备 | 第47-50页 |
| ·细胞的融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆 | 第47页 |
| ·腹水抗体制备和效价测定 | 第47页 |
| ·抗体的灵敏度测定 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第48页 |
| ·Western印迹分析 | 第48-49页 |
| ·三抗体夹心ELISA检测发病植物中的βC1蛋白 | 第49-50页 |
| ·Y10 βC1、Y35 βC1蛋白的免疫胶体金标记 | 第50-52页 |
| ·Y10 βC1蛋白在发病烟草中的免疫胶体金标记 | 第50页 |
| ·Y35 βC1蛋白在发病烟草中的免疫胶体金标记 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录A 本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第62-63页 |
| 附录B 常用术语缩写与中英文对照 | 第63-64页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第64-67页 |
| 附录D 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第67页 |
