| 致谢 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Summary | 第13-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-45页 |
| 第一章 葡萄病毒病的研究进展 | 第15-21页 |
| 1 葡萄病毒病发生和控制的历史和现状 | 第15-18页 |
| 1．1 葡萄病毒病的种类 | 第15页 |
| 1．2 经济重要性 | 第15页 |
| 1．3 流行和介体 | 第15-16页 |
| 1．4 检测 | 第16-17页 |
| 1．5 防治 | 第17-18页 |
| 2 最新建立、危害葡萄的新病毒属及有关病毒特性 | 第18-21页 |
| 2．1 葡萄病毒属（Vitivirus） | 第18页 |
| 2．2 茎陷点病毒属（Foveavirus） | 第18-19页 |
| 2．3 建议成立的属 | 第19页 |
| 2．4 葡萄卷叶伴随病毒 | 第19-20页 |
| 2．5 葡萄扇叶病毒 | 第20-21页 |
| 第二章 葡萄扇叶病毒的传播 | 第21-24页 |
| 1 繁殖材料和种子传播 | 第21页 |
| 2 传播GFLV病毒的线虫种类和传播特性 | 第21-22页 |
| 3 病毒与传毒线虫的关系 | 第22-24页 |
| 第三章 线虫传多面体病毒属的分子生物学研究进展 | 第24-34页 |
| 1 Nepovirus属病毒的成员 | 第24-26页 |
| 1．1 确定种 | 第24-25页 |
| 1．2 暂定种 | 第25-26页 |
| 2 Nepovirus属病毒的结构和组分 | 第26-27页 |
| 2．1 病毒的形态和组分 | 第26页 |
| 2．2 理化特性 | 第26页 |
| 2．3 核酸 | 第26-27页 |
| 2．4 外壳蛋白 | 第27页 |
| 3 RNA组装 | 第27页 |
| 4 基因结构和功能 | 第27-34页 |
| 4．1 概述 | 第27-28页 |
| 4．2 基因组结构和功能 | 第28-34页 |
| 4．2．1 聚腺苷酸化 | 第28页 |
| 4．2．2 VPg | 第28页 |
| 4．2．3 非编码区 | 第28-29页 |
| 4．2．4 RNA1编码的蛋白（P1） | 第29-31页 |
| 4．2．5 RNA2编码蛋白（P2） | 第31-34页 |
| 第四章 线虫传多面体病毒属病毒引起的组织病变、复制及其运输 | 第34-40页 |
| 1 组织病理变化 | 第34页 |
| 1．1 包含病毒粒子的管状结构 | 第34页 |
| 1．2 液泡中含有大量的病毒粒子 | 第34页 |
| 1．3 内含体 | 第34页 |
| 2 Nepoviruses病毒的复制 | 第34-37页 |
| 2．1 复制场所 | 第35页 |
| 2．2 Nepoviruses的复制过程 | 第35-36页 |
| 2．3 复制过程中的重组 | 第36-37页 |
| 2．4 复制的调控 | 第37页 |
| 3 Nepovirus属病毒的运输 | 第37-40页 |
| 3．1 细胞间移动 | 第37-39页 |
| 3．2 长距离运输 | 第39-40页 |
| 第五章 病毒介导的植物抗病毒基因工程和葡萄转基因工程研究进展 | 第40-45页 |
| 1 病原物介导的抗病毒基因工程 | 第40页 |
| 2 病毒基因或序列介导的抗病毒机制 | 第40-42页 |
| 2．1 转基因编码的蛋白介导的抗性 | 第40页 |
| 2．2 RNA介导的抗性 | 第40-41页 |
| 2．3 PTGS和同源依赖抗病性的可能机制 | 第41-42页 |
| 2．4 RNA介导的抗性特点及应用前景 | 第42页 |
| 3 抗葡萄病毒病的基因工程的前景 | 第42-43页 |
| 3．1 发根农杆菌（Agrobacterium rhizogens）介导的转化 | 第43页 |
| 3．2 微弹轰击（基因枪）转化法 | 第43页 |
| 3．2 根癌农杆菌（A．tumefaciens）介导的转化 | 第43页 |
| 4 转基因在烟草和葡萄中展示不同的表达水平 | 第43-45页 |
| 第二部分 实验研究 | 第45-102页 |
| 第六章 葡萄扇叶病毒杭州分离物的鉴定 | 第45-58页 |
| 1 材料和方法 | 第45页 |
| 1．1 毒源 | 第45页 |
| 1．2 抗血清 | 第45页 |
| 1．3 外壳蛋白基因PCR扩增的特异性引物 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-50页 |
| 2．1 症状观察及接种 | 第46页 |
| 2．2 病毒提纯 | 第46页 |
| 2．3 病毒粒子的电镜观察（磷钨酸负染法） | 第46页 |
| 2．4 血清学 | 第46-47页 |
| 2．5 外壳蛋白及基因组组分测定 | 第47-49页 |
| 2．6 外壳蛋白基因PT-PCR扩增 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| 2．1 田间症状 | 第50页 |
| 2．2 在几种指示植物上的症状 | 第50页 |
| 2．3 提纯病毒紫外吸收峰 | 第50-52页 |
| 2．4 病毒粒子的负染和免疫吸附观察 | 第52页 |
| 2．5 ELISA反应 | 第52页 |
| 2．6 外壳蛋白及基因组组分测定 | 第52页 |
| 2．7 外壳蛋白基因扩增 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 3．1 葡萄扇叶病毒在我国普遍存在 | 第53-54页 |
| 3．2 国内的葡萄扇叶病毒可能存在遗传多样性 | 第54页 |
| 3．3 有关nepoviruses所引起的症状恢复机制 | 第54-55页 |
| 4 结论 | 第55-58页 |
| 第七章 葡萄扇叶病传毒线虫的分离鉴定 | 第58-62页 |
| 1 材料和方法 | 第58-59页 |
| 1．1 土样来源和取样方法 | 第58页 |
| 1．2 分离 | 第58页 |
| 1．2．1 设备 | 第58页 |
| 1．2．2 化学试剂 | 第58页 |
| 1．3 分离程序 | 第58页 |
| 1．4 线虫的杀死、固定 | 第58-59页 |
| 1．5 脱水（Golden法，Hooper DJ， 1970） | 第59页 |
| 1．6 鉴定 | 第59页 |
| 1．7 自然传毒试验 | 第59页 |
| 2 结果 | 第59-60页 |
| 2．1 X． insigne Loos | 第59-60页 |
| 2．2 X． brevicolle Lordello & Da Costa | 第60页 |
| 2．3 传毒试验 | 第60页 |
| 3 讨论和结论 | 第60-62页 |
| 3．1 我国并不存在扇叶病自然传毒介体 | 第60-61页 |
| 3．2 推广无病苗木是控制我国葡萄扇叶病的关键 | 第61页 |
| 3．3 警惕标准剑线虫的传入 | 第61-62页 |
| 第八章 GFLV-H RNA2部分基因组克隆重及序列分析 | 第62-78页 |
| 1 材料与方法 | 第62-66页 |
| 1．1 毒源 | 第62页 |
| 1．2 cDNA合成 | 第62页 |
| 1．3 PCR产物纯化 | 第62-63页 |
| 1．4 cDNA克隆 | 第63-65页 |
| 1．4．1 PCR产物连接 | 第63页 |
| 1．4．2 感受态细胞制备 | 第63-64页 |
| 1．4．3 转化 | 第64页 |
| 1．4．4 重组克隆的筛选与鉴定 | 第64-65页 |
| 1．4．5 重组质粒鉴定 | 第65页 |
| 1．5 序列测定和分析 | 第65-66页 |
| 1．5．1 重组质粒的提取和纯化 | 第65-66页 |
| 1．5．2 序列测定及分析 | 第66页 |
| 2． 结果与讨论 | 第66-69页 |
| 2．1 GFLV-H RNA2部分cDNA的合成与克隆 | 第66-67页 |
| 2．2 基因的序列分析 | 第67页 |
| 2．3 GFLV各分离物CP同源性比较及其亲缘关系 | 第67页 |
| 2．4 GFLVH与另外9种nepoviruses CP同源性比较及亲缘关系 | 第67-68页 |
| 2．5 GFLV-H与另外5个nepoviruses MP同源性比较 | 第68-69页 |
| 3 本章小结 | 第69-78页 |
| 第九章 葡萄扇叶病毒引起的寄主细胞病变和移动蛋白在组织中的定位 | 第78-91页 |
| 1 材料与方法 | 第78-81页 |
| 1．1 材料 | 第78-79页 |
| 1．1．1 毒源 | 第78-79页 |
| 1．1．2 抗体和免疫胶体金 | 第79页 |
| 1．1．3 寄主 | 第79页 |
| 1．2 方法 | 第79-81页 |
| 1．2．1 常规包埋超薄切片 | 第79-80页 |
| 1．2．2 低温包埋超薄切片 | 第80页 |
| 1．2．3 超薄切片免疫金标记 | 第80-81页 |
| 1．2．4 透射电镜观察 | 第81页 |
| 1．3 移动蛋白的免疫印记杂交 | 第81页 |
| 2 结果 | 第81-83页 |
| 2．1 GFLV侵染后苋色藜的细胞超微结构变化 | 第81页 |
| 2．2 GFLV侵染后昆诺藜的细胞超微结构变化 | 第81-82页 |
| 2．3 移动蛋白的western blot检测 | 第82-83页 |
| 2．4 移动蛋白在寄主组织中的免疫定位 | 第83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 4 小结 | 第85-86页 |
| 版图9-1 感染GFLV的苋色藜叶肉细胞 | 第86-87页 |
| 版图9-2 感染GFLV的昆诺藜叶肉细胞 | 第87-88页 |
| 版图9-4 GFLV-H移动蛋白在昆诺藜和苋色藜组织中的免疫金标记 | 第88-91页 |
| 第十章 GFLV-CP基因植物表达载体构建和对葡萄的遗传转化 | 第91-102页 |
| 1 材料和方法 | 第91-94页 |
| 1．1 植物材料 | 第91页 |
| 1．2 GFLV-CP基因的扩增和克隆 | 第91页 |
| 1．3 菌株和质粒 | 第91页 |
| 1．4 酶和化学试剂 | 第91页 |
| 1．5 GFLV-H CP基因植物表达载体构建 | 第91-92页 |
| 1．5．1 GFLV-H CP cDNA片段制备 | 第91-92页 |
| 1．5．2 pBI121双元载体制备 | 第92页 |
| 1．5．3 质粒构建及鉴定 | 第92页 |
| 1．5．4 农杆菌转化 | 第92页 |
| 1．6 农杆菌及农杆菌中质粒的鉴定 | 第92-93页 |
| 1．6．1 3-基乳糖反应 | 第92页 |
| 1．6．2 农杆菌质粒鉴定 | 第92-93页 |
| 1．7 胚性愈伤组织、胚状体的诱导与成梢和生根培养基及培养条件 | 第93页 |
| 1．7．1 胚性愈伤组织诱导培养基 | 第93页 |
| 1．7．2 胚状体诱导培养基ERP培养基 | 第93页 |
| 1．7．3 胚状体萌发和生根培养基 | 第93页 |
| 1．8 共培养和筛选 | 第93-94页 |
| 1．8．1 根癌农杆菌的培养 | 第93页 |
| 1．8．2 共培养 | 第93-94页 |
| 1．9 转化植株的鉴定 | 第94页 |
| 1．9．1 根癌农杆菌的检测 | 第94页 |
| 1．9．2 PCR鉴定 | 第94页 |
| 2 结果 | 第94-97页 |
| 2．1 CP基因的扩增和克隆 | 第94-95页 |
| 2．2 GFLV-H CP基因的植物表达载体构建 | 第95页 |
| 2．2 重组质粒导入农杆菌 | 第95页 |
| 2．3 胚性愈伤组织的诱导 | 第95-96页 |
| 2．4 转化及其效率 | 第96页 |
| 2．5 转基因植株的PCR验证 | 第96-97页 |
| 2．6 检测阳性植株有无尚存的农杆菌 | 第97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| 4 本章小结 | 第98-101页 |
| 版10-2 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
