| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| ·乳糖酶的研究进展 | 第13-15页 |
| ·乳糖酶的来源 | 第13-14页 |
| ·乳糖酶水解乳糖可能的高级结构、作用机制及活性测定 | 第14-15页 |
| ·乳糖酶的应用 | 第15-18页 |
| ·乳糖酶在乳品生产中的应用 | 第15-17页 |
| ·乳糖酶基因在基因学中的应用 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第18-20页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第19页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达的影响因素，局限性及解决策略 | 第19-20页 |
| ·基因工程技术在乳糖酶生产中的应用 | 第20-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 产乳糖酶的纤维单胞菌的筛选、分离和鉴定 | 第24-34页 |
| ·材料和方法 | 第24-26页 |
| ·样品和菌株、质粒 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·工具酶和试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基及有关溶液的配置 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-28页 |
| ·菌体分离的方法 | 第26-27页 |
| ·乳糖酶活性检测 | 第27页 |
| ·产酶生长曲线的测定 | 第27页 |
| ·菌株的鉴定 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-31页 |
| ·筛选获得具有乳糖酶活性的菌株 Dm | 第28页 |
| ·Dm 生长过程产酶情况 | 第28-29页 |
| ·菌种鉴定 | 第29-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 乳糖酶基因的克隆 | 第34-49页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·菌种和质粒 | 第34页 |
| ·工具酶和试剂 | 第34页 |
| ·培养基和相关溶液配制 | 第34页 |
| ·所用引物序列 | 第34-36页 |
| ·方法 | 第36-40页 |
| ·纤维单胞菌基因组 DNA 的提取 | 第36页 |
| ·乳糖酶基因galc 的扩增及重组质粒的构建 | 第36-39页 |
| ·乳糖酶基因galc 的序列分析及同源性比较 | 第39-40页 |
| ·乳糖酶基因galc 的蛋白功能及三维结构预测 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-47页 |
| ·纤维单胞菌乳糖酶基因galc 的克隆和鉴定 | 第40-42页 |
| ·乳糖酶基因galc 的序列结果及同源性比较 | 第42-44页 |
| ·乳糖酶基因galc 的蛋白功能及三维结构预测 | 第44-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 乳糖酶基因GALC 的表达 | 第49-60页 |
| ·材料 | 第49-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49页 |
| ·工具酶和试剂 | 第49页 |
| ·培养基及有关溶液的配置 | 第49-51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·原核重组表达质粒的构建 | 第51页 |
| ·galc 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第51页 |
| ·原核表达乳糖酶的纯化 | 第51-52页 |
| ·乳糖酶活性测定方法 | 第52页 |
| ·毕赤酵母重组表达质粒的构建 | 第52页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·酵母转化 | 第52页 |
| ·筛选表达乳糖酶的转化子 | 第52-53页 |
| ·摇床水平各转化子的表达 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-58页 |
| ·含galc 基因的原核重组表达质粒pET-galc 的构建 | 第53-54页 |
| ·galc 基因在大肠杆菌中的表达 | 第54-57页 |
| ·含galc 基因的真核重组表达质粒pPIC9γ-galc 的构建 | 第57-58页 |
| ·galc 基因在毕赤酵母中的表达 | 第58页 |
| ·小结 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 原核表达乳糖酶酶学性质的分析 | 第60-67页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-62页 |
| ·乳糖酶样品的制备 | 第60页 |
| ·乳糖酶比活的测定 | 第60-61页 |
| ·乳糖酶的最适pH 测定 | 第61页 |
| ·乳糖酶的pH 稳定性测定 | 第61页 |
| ·乳糖酶的最适温度测定 | 第61页 |
| ·乳糖酶的热稳定性测定 | 第61页 |
| ·金属离子和相关化学试剂对乳糖酶活性的影响 | 第61页 |
| ·乳糖酶的Km 和Vmax 的测定 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-65页 |
| ·乳糖酶比活的测定 | 第62-63页 |
| ·乳糖酶的最适pH | 第63页 |
| ·乳糖酶的pH 稳定性 | 第63页 |
| ·乳糖酶的最适温度 | 第63-64页 |
| ·乳糖酶的热稳定性 | 第64页 |
| ·金属离子和相关化学试剂对乳糖酶活性的影响 | 第64-65页 |
| ·乳糖酶的Km 和 Vmax 值 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 第六章 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
