| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 材料与方法 | 第16-47页 |
| 一、实验材料 | 第16-26页 |
| 1. 工具酶及分子量Marker | 第16页 |
| 2. 主要生化试剂及试剂盒 | 第16-17页 |
| 3. 主要仪器及设备 | 第17页 |
| 4. 菌株 | 第17-18页 |
| 5. 细胞株 | 第18页 |
| 6. 质粒载体 | 第18-22页 |
| 7. cDNA文库 | 第22页 |
| 8. 抗体 | 第22-23页 |
| 9. 引物 | 第23-26页 |
| 二、实验方法 | 第26-47页 |
| 1. 扩增HZF1全长基因 | 第26页 |
| 2. 限制性内切酶酶切反应 | 第26-27页 |
| 3. 柱离心法回收DNA片段 | 第27页 |
| 4. DNA连接反应 | 第27-28页 |
| 5. 热击法大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 6. 大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| 7. 阳性克隆的筛选 | 第28-29页 |
| 8. 质粒DNA的小量提取 | 第29-30页 |
| 9. 质粒DNA的大量制备 | 第30-31页 |
| 10. 酵母双杂交系统 | 第31-38页 |
| ·构建诱饵质粒 | 第31页 |
| ·文库滴度的测定 | 第31页 |
| ·文库的扩增 | 第31-32页 |
| ·酵母转化 | 第32-35页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的检测 | 第35-36页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·阳性克隆插入片段的PCR扩增及鉴定 | 第37-38页 |
| ·二次转化 | 第38页 |
| 11. 生物分析软件 | 第38页 |
| 12. 细胞培养、复苏、传代、冻存和诱导 | 第38-39页 |
| 13. 细胞诱导分化检测 | 第39-40页 |
| ·红系分化的诱导检测-联苯胺染色法 | 第39页 |
| ·巨核系分化的诱导检测-吉姆萨染色法 | 第39-40页 |
| 14. 细胞系的转染 | 第40-41页 |
| ·脂质体介导的真核细胞转染和稳定细胞株的筛选 | 第40页 |
| ·磷酸钙法转染真核细胞 | 第40-41页 |
| 15. TRIZOI法提取细胞总RNA | 第41页 |
| 16. M-MLV(INVITROGEN)合成cDNA第一链(反转录) | 第41-42页 |
| 17. Real-time PCR | 第42-43页 |
| 18. 蛋白质浓度测定 | 第43页 |
| ·BCA法测定蛋白质浓度的实验原理 | 第43页 |
| ·实验步骤 | 第43页 |
| 19. Western blot分析 | 第43-45页 |
| ·细胞抽提液制备 | 第43-44页 |
| ·Western B!ot | 第44-45页 |
| 20. 免疫共沉淀 | 第45-46页 |
| 21. 使用基因芯片检测基因表达差异 | 第46-47页 |
| ·样品的制备 | 第46页 |
| ·基因表达芯片的类型 | 第46页 |
| ·基因表达差异分析 | 第46-47页 |
| 实验结果 | 第47-67页 |
| 1. 酵母双杂交筛选与HZF1相互作用的蛋白质 | 第47-59页 |
| ·酵母菌Y190表型的验证 | 第47页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·自激活检测实验 | 第48页 |
| ·诱饵质粒的重新构建及自激活检测 | 第48-49页 |
| ·人骨髓cDNA文库的扩增 | 第49页 |
| ·文库转化和初步筛选阳性克隆 | 第49-51页 |
| ·阳性克隆的分类及测序 | 第51页 |
| ·利用BLAST在线比对cDNA序列 | 第51-54页 |
| ·二次转化再鉴定阳性克隆 | 第54页 |
| ·阳性克隆15-83、8-23和11-20分析 | 第54-59页 |
| 2. 免疫共沉淀进一步确认相互作用的存在 | 第59-61页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第59页 |
| ·确认INCA1和HZF1基因片段H2的相互作用 | 第59页 |
| ·确认FHL1和HZF1基因片段H2的相互作用 | 第59-61页 |
| ·ZNF7不能和HZF1基因片段H2相互作用 | 第61页 |
| 3. INCA1在hemin诱导K562红系分化过程中的表达变化 | 第61-62页 |
| 4. HZF1表达阻遏对ERK信号通路的影响 | 第62-65页 |
| ·稳定转染株K562/pAVu6HZF1i和K562/pAVu6的诱导分化 | 第62-63页 |
| ·HZF1阻遏增加K562红系分化过程中ERK和MEK磷酸化水平 | 第63-64页 |
| ·HZF1阻遏增加K562巨核系分化过程中ERK和MEK磷酸化水平 | 第64-65页 |
| 5. 利用基因芯片检测HZF1表达阻遏前后K562细胞基因表达差异 | 第65-67页 |
| 讨论 | 第67-74页 |
| 1. 利用酵母双杂交的方法筛选到与HZF1相互作用的蛋白质 | 第67-69页 |
| 2. HZF1表达阻遏对ERK信号通路的影响 | 第69-71页 |
| 3. 利用基因芯片分析HZF1表达阻遏前后基因表达差异情况，获取HZF1功能机制的线索 | 第71-74页 |
| 展望 | 第74-75页 |
| 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 文献综述 | 第84-105页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 攻读博士期间发表和待发表的论文和参加的学术会议 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 附录 英汉名词对照 | 第107-110页 |
