| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1 转基因植物的遗传和表达 | 第10-11页 |
| 2 T-DNA标签技术在植物功能基因组研究中的应用 | 第11-18页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA插入 | 第12-13页 |
| ·T-DNA的整合特性 | 第13-14页 |
| ·T-DNA插入突变的几种策略 | 第14-16页 |
| ·T-DNA插入位点侧翼序列的分离 | 第16-17页 |
| ·T-DNA插入突变体在水稻功能基因组研究中的应用 | 第17-18页 |
| ·运用T-DNA插入突变体研究水稻功能基因组的进展 | 第17-18页 |
| ·T-DNA插入突变体在水稻功能基因组研究中的问题 | 第18页 |
| 3 开花植物雄配子体发育研究进展 | 第18-21页 |
| ·开花植物雄配子突变体的筛选及基因功能研究 | 第19-20页 |
| ·水稻雄配子体发育相关基因研究进展 | 第20-21页 |
| 4 本研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 水稻雄配子不育突变群体的筛选建立及遗传分析 | 第23-30页 |
| 1 材料与方法 | 第23-25页 |
| ·供试材料 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·突变群体的筛选建立 | 第23页 |
| ·突变体的花粉细胞学观察 | 第23-24页 |
| ·突变体中外源基因表达检测 | 第24-25页 |
| ·样品采集 | 第24页 |
| ·可溶性总蛋白的提取及定量 | 第24页 |
| ·crylAc蛋白表达的双抗夹心ELISA法检测 | 第24-25页 |
| ·数据分析 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-30页 |
| ·候选突变体外源标记基因的遗传分析和候选突变体的初步分类 | 第25-27页 |
| ·突变体的花粉细胞学观察 | 第27-28页 |
| ·突变体的外源基因表达分析 | 第28-29页 |
| ·水稻T-DNA插入雄配子不育突变体群体的确定 | 第29-30页 |
| 第三章 水稻雄配子不育突变体的分子信息获得及分析 | 第30-36页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| ·供试材料 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-32页 |
| ·候选突变体侧翼序列的分离 | 第30-31页 |
| ·水稻PCR模板的制备 | 第30-31页 |
| ·TAIL-PCR扩增 | 第31页 |
| ·TAIL-PCR扩增产物的回收及测序 | 第31页 |
| ·插入位点的验证 | 第31页 |
| ·候选突变体侧翼序列分子信息的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-36页 |
| ·候选突变体侧翼序列获得 | 第32页 |
| ·候选突变体侧翼序列分子信息的生物信息学分析 | 第32-36页 |
| ·T-DNA插入位点在染色体上的分布 | 第32-33页 |
| ·插入位点的验证 | 第33-34页 |
| ·相关候选基因预测分析 | 第34页 |
| ·启动子预测及其区域调控元件分析 | 第34-36页 |
| 第四章 水稻雄配子发育相关基因和其启动子克隆及相关表达载体构建 | 第36-47页 |
| 1 材料与方法 | 第36-41页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·供试水稻品种 | 第36页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| ·水稻基因组模板获得 | 第36-37页 |
| ·水稻cDNA模板的获得 | 第37-38页 |
| ·水稻总RNA的提取 | 第37页 |
| ·DNaseI处理除基因组DNA | 第37-38页 |
| ·RT-PCR | 第38页 |
| ·候选基因及其启动子的克隆 | 第38-40页 |
| ·PCR扩增引物的设计合成 | 第38-39页 |
| ·候选基因及启动子序列的扩增、同收重组 | 第39-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40页 |
| ·表达载体的转化 | 第40页 |
| ·遗传转化 | 第40页 |
| ·转基因再生植株的检测 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-47页 |
| ·水稻雄配子发育相关基因及其启动子克隆 | 第41-42页 |
| ·基因启动子、编码序列的扩增 | 第41页 |
| ·候选基因启动子、编码序列的克隆及其克隆载体的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·载体插入片段的测序鉴定 | 第42页 |
| ·水稻雄配子发育相关基因M6编码序列正义表达载体的构建及其酶切鉴定 | 第42-44页 |
| ·水稻雄配子发育相关基因M6启动子与gus融合表达载体的构建及酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·水稻雄配子发育相关基因M1启动子与gus融合表达载体的构建及酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·表达载体连接处的测序鉴定 | 第46页 |
| ·转基因植株的获得 | 第46页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第46-47页 |
| 第五章 讨论与小结 | 第47-51页 |
| 1 讨论 | 第47-49页 |
| ·候选突变体内源基因变异原因 | 第47页 |
| ·侧翼序列分析 | 第47-48页 |
| ·T-DNA插入对基因的影响模式 | 第48页 |
| ·候选功能基因 | 第48-49页 |
| 2 小结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录Ⅰ 实验方法 | 第59-65页 |
| 附录Ⅱ 相关引物 | 第65-66页 |
| 附录Ⅲ TAIL-PCR反应体系和条件 | 第66-67页 |
| 附录Ⅳ 本研究所用基本培养基配方 | 第67-71页 |
| 附录Ⅴ 部分相关溶液的配制方法 | 第71-72页 |
| 附录Ⅵ 相关启动子的主要顺式元件 | 第72-74页 |
| 附录Ⅶ 本文所用DNA Marker及质粒图谱 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
