| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 第一篇 综述部分 | 第9-33页 |
| 综述一：“睡美人”转座子的研究进展 | 第9-19页 |
| 1 转座子与“睡美人”转座子的复苏 | 第9-10页 |
| 2 SB 转座系统的结构 | 第10-13页 |
| ·转座酶基因 | 第10-12页 |
| ·“睡美人”转座子 | 第12-13页 |
| 3 转座的机制 | 第13-14页 |
| 4 SB 转座子系统特性 | 第14-17页 |
| ·转座效率的影响因素 | 第14-16页 |
| ·安全性 | 第16-17页 |
| 5 SB 转座子系统的检测 | 第17页 |
| 6 SB 转座子系统的应用 | 第17-19页 |
| ·用做作转基因载体 | 第17-18页 |
| ·促进外源基因表达 | 第18页 |
| ·基因治疗 | 第18页 |
| ·新基因的发现 | 第18-19页 |
| 综述二 转基因动物的研究进展 | 第19-28页 |
| 1 转基因的主要技术 | 第20-28页 |
| ·原核注射法 | 第20页 |
| ·逆转录病毒感染法 | 第20页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第20-21页 |
| ·电转移法 | 第21页 |
| ·人工酵母染色体(YAC) 法 | 第21页 |
| ·体细胞核移植转基因法 | 第21-22页 |
| ·精子载体法 | 第22-28页 |
| 2 存在问题 | 第28页 |
| 综述三 基因免疫的研究进展 | 第28-33页 |
| 1 基因疫苗的发展概况 | 第29页 |
| 2 基因疫苗的免疫学机理 | 第29-30页 |
| 3 基因疫苗的免疫佐剂 | 第30-33页 |
| ·免疫刺激DNA 序列 | 第30页 |
| ·细胞因子的免疫佐剂效应 | 第30-31页 |
| ·趋化因子和共刺激分子基因作为DNA 疫苗免疫调节剂 | 第31页 |
| ·基因佐剂联合应用作为DNA 疫苗免疫调节剂 | 第31-33页 |
| 第二篇 实验部分 | 第33-68页 |
| 第一章 “睡美人”转座子载体的构建 | 第33-42页 |
| 1 材料与方法 | 第33-34页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-39页 |
| ·人乳铁蛋白克隆载体PSPⅡ-EGFP 的复苏 | 第34-35页 |
| ·碱性裂解法小规模提取质粒 | 第35页 |
| ·质粒PSPⅡ-EGFP 的Nru Ⅰ/Xho IⅠ酶切鉴定 | 第35页 |
| ·EcoRV 酶切质粒PT_2-HB | 第35-36页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第36页 |
| ·质粒PSPⅡ-EGFP 的NruⅠ/XhoI Ⅰ酶切，补平及纯化 | 第36-37页 |
| ·5’UTR-EGFP-3’UTR 与PT_2-HB 之间的平端连接及转化 | 第37页 |
| ·目的质粒的鉴定 | 第37-39页 |
| 3 结果 | 第39-41页 |
| ·质粒PSPⅡ-EGFP 的Nru Ⅰ/Xho IⅠ酶切鉴定 | 第39页 |
| ·PT_2-EGFP 及PSPⅡ-EGFP 质粒的酶切验证 | 第39-40页 |
| ·质粒PT_2-EGFP 的5’PCR 验证结果 | 第40页 |
| ·质粒PT_2-EGFP 的GFP 验证结果 | 第40-41页 |
| ·质粒PT_2-EGFP 的3’PCR 验证结果 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第二章 睾丸注射法制备转基因动物方法的初步优化 | 第42-52页 |
| 1 材料 | 第42页 |
| 2 试验方法 | 第42-45页 |
| ·质粒的准备 | 第42-43页 |
| ·外源DNA-PEI 混合物的制备 | 第43页 |
| ·睾丸内DNA-PEI 混合物的注射 | 第43页 |
| ·转基因小鼠的PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·对于睾丸注射法制备转基因小鼠方法的优化 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-49页 |
| ·转基因小鼠的PCR 检测 | 第45-47页 |
| ·睾丸注射法制备转基因小鼠方法的优化 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 “睡美人”转座子系统介导与普通睾丸直接注射法制备转基因动物的效率比较 | 第52-61页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·主要试验仪器 | 第53页 |
| ·主要实验试剂 | 第53页 |
| 2 试验方法 | 第53-54页 |
| ·质粒的准备 | 第53页 |
| ·外源DNA-PEI 混合物的制备 | 第53-54页 |
| ·睾丸内DNA-PEI 混合物的注射 | 第54页 |
| ·转基因小鼠的表达鉴定 | 第54页 |
| 3 结果与讨论 | 第54-58页 |
| ·“睡美人”转座子系统对于外源基因整合的促进作用 | 第54-56页 |
| ·转基因小鼠的表达鉴定 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 第四章 “睡美人”转座酶对基因免疫的促进作用 | 第61-68页 |
| 1 材料与方法 | 第62-63页 |
| ·材料与试剂 | 第62页 |
| ·hLFcDNA 的克隆及真核表达载体的构建 | 第62页 |
| ·基因免疫 | 第62-63页 |
| ·间接ELISA 法血清效价的测定 | 第63页 |
| ·用自制抗体进行的Western-blotting 检测 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-65页 |
| ·hLF 基因的真核表达载体构建 | 第63-64页 |
| ·基因免疫抗体的效价 | 第64-65页 |
| ·自制抗体的初步应用 | 第65页 |
| 3 讨论 | 第65-68页 |
| 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 攻读硕士学位论文期间发表学术论文 | 第81-82页 |
