| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-49页 |
| ·哺乳动物卵母细胞和早期胚胎生长发育 | 第15-16页 |
| ·哺乳动物卵母细胞的生长和成熟 | 第15-16页 |
| ·哺乳动物早期胚胎的发育 | 第16页 |
| ·c-mos基因的表达以及功能 | 第16-25页 |
| ·c-mos基因的表达及调控 | 第16-19页 |
| ·卵母细胞中MOS作用 | 第19-21页 |
| ·MOS在精子发生过程中的表达和作用 | 第21页 |
| ·MOS激酶途径以及核心分子MAPK | 第21-25页 |
| ·Oct-4基因的表达以及功能 | 第25-36页 |
| ·Oct-4在哺乳动物早期胚胎中的表达和调控 | 第25-28页 |
| ·Oct-4与细胞分化 | 第28-29页 |
| ·Oct-4与全能性调节 | 第29-31页 |
| ·Oct-4因子的功能实现 | 第31-35页 |
| ·Oct-4在低等动物中有同源基因 | 第35页 |
| ·Oct-4和体细胞克隆 | 第35-36页 |
| ·Oct-4和癌症 | 第36页 |
| ·Oct-4基因在基础研究和医学研究中的应用 | 第36页 |
| ·哺乳动物RNAi机制以及RNAi在卵母细胞和早期胚胎中应用 | 第36-46页 |
| ·哺乳动物的RNAi | 第36-44页 |
| ·RNAi在哺乳动物卵母细胞及早期胚胎发育研究中的应用 | 第44-46页 |
| ·去透明带卵母细胞的研究和应用 | 第46-47页 |
| ·本研究的目的意义 | 第47-49页 |
| 2 材料与方法 | 第49-63页 |
| ·猪卵母细胞和孤雌胚胎的获得和体外培养 | 第49-50页 |
| ·卵母细胞的采集和成熟培养 | 第49-50页 |
| ·卵母细胞的激活和孤雌卵母细胞的培养 | 第50页 |
| ·对猪卵母细胞的去卵丘和去透明带处理 | 第50-51页 |
| ·去卵丘处理 | 第50-51页 |
| ·不同去透明带试剂的配制 | 第51页 |
| ·去透明带处理 | 第51页 |
| ·无透明带卵母细胞成熟培养、孤雌激活和无透明带孤雌胚胎体外培养 | 第51-53页 |
| ·无透明带卵母细胞的成熟培养 | 第51-52页 |
| ·无透明带卵母细胞的孤雌激活 | 第52页 |
| ·无透明带孤雌胚胎的体外培养 | 第52-53页 |
| ·猪卵母细胞和早期胚胎总RNA的提取 | 第53-55页 |
| ·卵母细胞和胚胎材料处理和保存 | 第53页 |
| ·总RNA的提取和保存 | 第53-54页 |
| ·提取RNA的质量检测 | 第54-55页 |
| ·反转录PCR和反转录实时定量PCR(Realtime PCR) | 第55-58页 |
| ·反转录PCR | 第55-56页 |
| ·反转录Realtime PCR | 第56-57页 |
| ·定量PCR引物的设计和序列合成 | 第57-58页 |
| ·Realtime PCR结果分析方法 | 第58页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测免疫荧光实验 | 第58-60页 |
| ·液体的准备 | 第58-59页 |
| ·抗体的分装和储存 | 第59页 |
| ·免疫荧光染色步骤 | 第59页 |
| ·装片 | 第59页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第59页 |
| ·卵母细胞核的分型 | 第59-60页 |
| ·MOS蛋白的检测时间 | 第60页 |
| ·胚胎细胞数的检测 | 第60页 |
| ·自发孤雌激活早期胚胎细胞数目检测 | 第60页 |
| ·囊胚细胞数检测 | 第60页 |
| ·siRNA RNA干扰体系 | 第60-62页 |
| ·siRNA设计和序列合成 | 第60-61页 |
| ·干扰序列的注射 | 第61-62页 |
| ·注射效率的检测 | 第62页 |
| ·数据分析和图表制作 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-89页 |
| ·猪卵母细胞透明带去除方法建立及去透明带后激活电压摸索 | 第63-66页 |
| ·不同试剂去除透明带效果比较 | 第63-64页 |
| ·不同电压电激活后对无透明(ZPF)带卵母细胞后期发育影响 | 第64-66页 |
| ·MOS和Oct-4蛋白功能结构域分析和系统发生分析 | 第66-72页 |
| ·猪MOS的功能结构域分析 | 第66-67页 |
| ·c-mos基因的系统发生分析 | 第67-69页 |
| ·Oct-4蛋白的功能结构域分析 | 第69页 |
| ·Oct-4基因的系统发生分析 | 第69-72页 |
| ·c-mos基因表达和RNAi | 第72-77页 |
| ·c-mos基因表达 | 第72-73页 |
| ·c-mos基因的RNAi | 第73-77页 |
| ·Oct-4基因的表达和RNAi | 第77-80页 |
| ·Oct-4基因表达 | 第77-78页 |
| ·Oct-4基因的RNAi | 第78-80页 |
| ·猪卵母细胞中母源基因表达产物siRNA RNAi体系特性 | 第80-89页 |
| ·序列注射对卵母细胞发育的影响 | 第80-81页 |
| ·不同时期卵母细胞注射效率试验 | 第81-83页 |
| ·不同浓度干扰序列的干扰效果 | 第83-86页 |
| ·不同RNAi反应时间的干扰效果 | 第86-89页 |
| 4 讨论 | 第89-99页 |
| ·猪卵母细胞透明带去除方法建立及无透明带卵母细胞激活条件摸索 | 第89-90页 |
| ·关于不同试剂处理后去除透明带效果的评价 | 第89页 |
| ·关于WOW培养方法及其改进 | 第89-90页 |
| ·不同电压电激活后对ZPF孤雌胚发育的影响 | 第90页 |
| ·c-mos基因和Oct-4基因系统发生分析 | 第90-92页 |
| ·关于Neighbor-Joining算法构建系统进化树 | 第90-91页 |
| ·c-mos基因的系统发生分析 | 第91页 |
| ·Oct-4基因的系统发生分析 | 第91-92页 |
| ·c-mos基因与Oct-4基因的表达和RNAi | 第92-95页 |
| ·关于Realtime PCR | 第92页 |
| ·猪卵母细胞体外成熟前后c-mos基因mRNA水平变化 | 第92页 |
| ·猪卵母细胞体外成熟前后MOS表达和分布变化 | 第92-93页 |
| ·c-mos基因干扰效果 | 第93-94页 |
| ·Oct-4基因表达和RNAi | 第94页 |
| ·关于siRNA的设计 | 第94-95页 |
| ·siRNA效应分子RNAi方法研究卵母细胞中的功能基因 | 第95页 |
| ·猪卵母细胞中RNAi特点 | 第95-99页 |
| ·不同浓度干扰序列的干扰效果 | 第95-96页 |
| ·RNAi反应对时间的依赖性 | 第96页 |
| ·干扰序列注射时间的选择 | 第96-97页 |
| ·关于注射效率和干扰效率 | 第97页 |
| ·猪卵母细胞进行RNAi的优势 | 第97-99页 |
| 5 结论 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 附录 | 第111-121页 |
| 博士期间发表的文章 | 第121页 |
