| 中文摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 缩略词 | 第17-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 上篇 文献综述 | 第21-40页 |
| 第一章 梨组织培养的研究进展 | 第21-25页 |
| 1 梨茎尖培养 | 第21-22页 |
| ·材料的采集和准备 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·植物生长调节物质 | 第22页 |
| ·培养条件 | 第22页 |
| 2 梨叶片培养 | 第22-24页 |
| ·外植体选取及处理 | 第23页 |
| ·基本培养基 | 第23页 |
| ·植物生长调节物质 | 第23-24页 |
| ·培养条件 | 第24页 |
| 3 展望 | 第24-25页 |
| 第二章 果树基因工程的研究进展 | 第25-34页 |
| 1 果树转基因的现状 | 第25-28页 |
| ·苹果的转基因 | 第25页 |
| ·柑橘的转基因 | 第25-26页 |
| ·梨的转基因 | 第26页 |
| ·核果类果树的转基因 | 第26-27页 |
| ·葡萄、猕猴桃的转基因 | 第27页 |
| ·其他 | 第27-28页 |
| 2 耐贮藏基因工程的研究进展 | 第28-33页 |
| ·ACC合成酶(ACS)基因 | 第30-31页 |
| ·ACC合酶(ACS)基因的克隆 | 第30页 |
| ·ACC合成酶(ACS)基因的转化 | 第30-31页 |
| ·ACC氧化酶(ACO)基因 | 第31-32页 |
| ·ACC氧化酶(ACO)基因的克隆 | 第31页 |
| ·ACC氧化酶(ACO)基因的转化 | 第31-32页 |
| ·脂氧合酶基因(LOX)基因 | 第32-33页 |
| ·脂氧合酶(LOX)基因的克隆 | 第32页 |
| ·脂氧合酶(LOX)基因的转化 | 第32-33页 |
| 3 展望 | 第33-34页 |
| 第三章 RNAi的研究进展 | 第34-40页 |
| 1 RNAi的发现 | 第34-35页 |
| 2 RNAi可能的作用机制 | 第35-36页 |
| ·与RNAi作用相关的酶 | 第35页 |
| ·RNAi的作用过程 | 第35-36页 |
| ·转录后基因沉默 | 第35-36页 |
| ·基因组DNA甲基化 | 第36页 |
| 3 RNAi的技术特点 | 第36-38页 |
| 4 RNAi在植物品种遗传改良中的应用 | 第38-39页 |
| ·植物的功能基因学研究 | 第38页 |
| ·植物的品质改良 | 第38-39页 |
| 5 展望 | 第39-40页 |
| 下篇 研究报告 | 第40-105页 |
| 第四章 ‘若光'梨叶片诱导不定芽的研究 | 第40-47页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·外植体消毒及无菌苗诱导培养 | 第41页 |
| ·增殖培养 | 第41-42页 |
| ·不同激素种类及其配比对叶片再生的影响 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-45页 |
| ·不同培养基对诱导培养的影响 | 第42页 |
| ·不同激素浓度对‘若光'梨增殖培养的影响 | 第42-43页 |
| ·不同激素种类及浓度对‘若光'梨叶片再生不定芽的影响 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 4 结论 | 第46-47页 |
| 第五章 砂梨ACC氧化酶基因启动子区域的分离及序列分析 | 第47-59页 |
| 1 材料与方法 | 第48-54页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·植物材料和质粒 | 第48页 |
| ·酶和试剂 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·‘若光'梨叶片总DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·DNA质量检测方法 | 第49页 |
| ·基因组的酶切回收与检测 | 第49-50页 |
| ·接头的制备 | 第50-51页 |
| ·接头与酶切产物的连接 | 第51页 |
| ·上游序列的PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR产物的回收与克隆及测序 | 第52-54页 |
| ·PCR验证及序列分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·DNA的提取与纯化 | 第54页 |
| ·ACC氧化酶基因上游DNA序列的获得以及PCR验证 | 第54-55页 |
| ·梨ACC氧化酶基因上游DNA序列的分析 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 第六章 梨ACC氧化酶基因(ACO)的片段克隆及其RNAi载体构建 | 第59-71页 |
| 1 材料与方法 | 第60-65页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·植物材料和质粒 | 第60页 |
| ·酶和试剂 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-65页 |
| ·‘若光'梨果实总RNA的提取 | 第60-61页 |
| ·总RNA中DNA的消化 | 第61-62页 |
| ·反转录和RT-PCR | 第62-63页 |
| ·RT-PCR产物的克隆与测序 | 第63页 |
| ·ACO正、反基因及间隔基因(YYT)的克隆 | 第63-65页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-69页 |
| ·‘若光'梨果实总RNA的提取 | 第65-66页 |
| ·ACO基因的克隆与序列分析 | 第66-67页 |
| ·重组基因的克隆与序列分析 | 第67-68页 |
| ·ACC氧化酶基因(ACO)重组RNAi载体的构建与鉴定 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69页 |
| 4 结论 | 第69-71页 |
| 第七章 农杆菌介导砂梨DSACO基因转化番茄 | 第71-80页 |
| 1 材料与方法 | 第72-76页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·植物材料和试剂、耗材 | 第72页 |
| ·菌种和质粒 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·番茄的无菌苗的获得 | 第73页 |
| ·番茄转基因苗的获得 | 第73-74页 |
| ·转基因番茄的检测 | 第74-76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-78页 |
| ·Km抗性苗的获得与GUS检测 | 第76-77页 |
| ·基因组DNA的PCR检测 | 第77页 |
| ·RT-PCR检测 | 第77-78页 |
| ·转基因对乙烯发生量的影响 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-79页 |
| 4 结论 | 第79-80页 |
| 第八章 砂梨脂氧合酶cDNA片段的克隆、序列分析及RNAi表达载体的构建 | 第80-90页 |
| 1 材料与方法 | 第82-84页 |
| ·材料 | 第82页 |
| ·植物材料和质粒、菌株 | 第82页 |
| ·酶和试剂 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-84页 |
| ·‘若光'梨果实总RNA的提取 | 第82页 |
| ·反转录和RT-PCR | 第82-83页 |
| ·RT-PCR产物的克隆与序列分析 | 第83页 |
| ·LOX融合基因的连接与克隆 | 第83页 |
| ·RNAi载体的构建及鉴定 | 第83-84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-88页 |
| ·RT-PCR产物的克隆、测序 | 第84-85页 |
| ·LOX基因序列比对与聚类分析 | 第85-86页 |
| ·LOX正、反义基因的克隆以及融合基因的连接 | 第86-87页 |
| ·RNAi载体的构建及鉴定 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 4 结论 | 第89-90页 |
| 第九章 农杆菌介导砂梨DSLOX基因转化烟草 | 第90-98页 |
| 1 材料与方法 | 第91-94页 |
| ·材料 | 第91-92页 |
| ·植物材料和试剂 | 第91页 |
| ·菌种和质粒 | 第91页 |
| ·烟草组织培养培养基 | 第91-92页 |
| ·方法 | 第92-94页 |
| ·农杆菌菌株的活化 | 第92页 |
| ·烟草叶盘法遗传转化 | 第92页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第92-93页 |
| ·LOX及相关酶活性、MDA含量的测定 | 第93-94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-97页 |
| ·Km抗性苗的获得 | 第94页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第94-97页 |
| ·转基因烟草植株GUS检测 | 第94-95页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第95页 |
| ·转基因烟草植株RT-PCR检测 | 第95-96页 |
| ·转基因对烟草相关酶活性和MDA的影响 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97页 |
| 4 结论 | 第97-98页 |
| 第十章 砂梨LOX基因家族的克隆与序列分析 | 第98-105页 |
| 1 材料与方法 | 第99-100页 |
| ·材料 | 第99页 |
| ·植物材料和质粒、菌株 | 第99页 |
| ·酶和试剂 | 第99页 |
| ·方法 | 第99-100页 |
| ·‘若光'梨果实总RNA的提取 | 第99-100页 |
| ·反转录和RT-PCR | 第100页 |
| ·RT-PCR产物的克隆与序列分析 | 第100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-104页 |
| ·RT-PCR产物的克隆、测序 | 第100-102页 |
| ·LOX基因家族间序列比对与聚类分析 | 第102-104页 |
| 3 讨论 | 第104页 |
| 4 结论 | 第104-105页 |
| 全文讨论 | 第105-108页 |
| 全文结论 | 第108-110页 |
| 创新点 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-129页 |
| 附录 | 第129-148页 |
| 附录1:本论文中所用缓冲液及溶液的配置 | 第130-133页 |
| 附录2:本论文中所用培养基的配置 | 第133-135页 |
| 附录3:本论文中所用感受态CCM80的制备 | 第135-137页 |
| 附录4:本论文中农杆菌LBA4404感受态的制备及转化 | 第137-138页 |
| 附录5:本论文中登录的序列以及构建的载体序列 | 第138-147页 |
| 附图 | 第147-148页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149页 |
