| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| ·头孢菌素C的研究背景及其合成调控 | 第11-17页 |
| ·头孢菌素C的研究背景 | 第11-12页 |
| ·头孢菌素C的合成途径 | 第12-14页 |
| ·头孢菌素C生物合成的调控 | 第14-17页 |
| ·L-α-氨基己二酸 | 第14页 |
| ·甲硫氨酸 | 第14-15页 |
| ·选择性呼吸途径 | 第15-16页 |
| ·溶氧水平 | 第16-17页 |
| ·Genome Shuffling的原理及其应用 | 第17-20页 |
| ·Genome Shuffling的原理 | 第17-18页 |
| ·Genome Shuffling技术在工业生产中的应用 | 第18-19页 |
| ·原生质体融合技术 | 第19-20页 |
| ·原生质体融合的方法主要有: | 第19页 |
| ·原生质体融合亲本标记技术 | 第19-20页 |
| ·丝状真菌转化系统 | 第20-24页 |
| ·常用的转化方法 | 第21-23页 |
| ·PEG/CaCl_2介导的原生质体法 | 第21-22页 |
| ·原生质体电转化法 | 第22页 |
| ·基因枪转化法 | 第22页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第22-23页 |
| ·丝状真菌转化系统的选择标记 | 第23-24页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的研究与应用 | 第24-25页 |
| ·血红蛋白的结构与特性 | 第24页 |
| ·血红蛋白的生理功能 | 第24-25页 |
| ·血红蛋白的工业应用 | 第25页 |
| ·本文研究内容和技术路线 | 第25-27页 |
| 第二章 A.chrysogenum的发酵特性及发酵条件优化 | 第27-35页 |
| ·材料与方法 | 第27-29页 |
| ·菌株和保存 | 第27页 |
| ·仪器与试剂 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·培养条件 | 第28-29页 |
| ·摇瓶种子培养 | 第28页 |
| ·摇瓶发酵培养 | 第28-29页 |
| ·分析方法 | 第29页 |
| ·发酵液的分析检测 | 第29页 |
| ·总糖和还原糖测定方法 | 第29页 |
| ·无机氮的测定方法 | 第29页 |
| ·A.chrysogenum发酵特性分析 | 第29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-34页 |
| ·正交实验优化培养基配方 | 第29-30页 |
| ·培养基配方优化 | 第30-31页 |
| ·头孢菌素C发酵过程中菌丝体发育观察 | 第31-32页 |
| ·培养基优化前后发酵参数比较 | 第32页 |
| ·培养基优化后头孢菌素C合成比较: | 第32-33页 |
| ·接种条件优化提高头孢菌素C产量 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 利用传统菌种改良(CSI)技术对A.chrysogenum的改良 | 第35-43页 |
| ·材料与方法 | 第35-37页 |
| ·菌株和保存 | 第35页 |
| ·仪器与试剂 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·培养条件 | 第36页 |
| ·分析方法 | 第36页 |
| ·95%紫外线致死照射剂量的确定 | 第36页 |
| ·筛选因子以及最小致死剂量 | 第36-37页 |
| ·A.chrysogenum的紫外线递归诱变 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-42页 |
| ·95%紫外线致死照射剂量的确定 | 第37-38页 |
| ·递归诱变与各抗性突变株的筛选 | 第38-42页 |
| ·菌丝体分化加快突变株的获得 | 第38-39页 |
| ·筛选丙二酸耐受突变株 | 第39-40页 |
| ·筛选节孢子生成能力加强突变株 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 Genome Shuffling技术在A.chrysogenum育种中的应用 | 第43-54页 |
| ·材料与方法 | 第43-46页 |
| ·菌株与保存 | 第43页 |
| ·仪器与试剂 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·培养条件 | 第44页 |
| ·分析方法 | 第44页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的制备与再生 | 第44-45页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的制备条件优化 | 第45-46页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的双灭活 | 第46页 |
| ·紫外灭活 | 第46页 |
| ·热灭活 | 第46页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的融合 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-53页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的制备 | 第46-49页 |
| ·原生质体的释放 | 第46-47页 |
| ·原生质体的制备条件优化 | 第47-49页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的液体再生 | 第49-50页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的双灭活条件 | 第50页 |
| ·A.chrysogenum原生质体的融合 | 第50-51页 |
| ·A.chrysogenum融合子的筛选与分析 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 A.chrysogenum中表达血红蛋白(VHb)的研究 | 第54-64页 |
| ·材料与方法 | 第54-58页 |
| ·菌株和质粒 | 第54-55页 |
| ·酶和试剂 | 第55页 |
| ·培养基和培养方法 | 第55页 |
| ·大肠杆菌超级感受态细胞的制备与转化 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌超级感受态细胞的制备 | 第55页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第55-56页 |
| ·重组DNA技术 | 第56页 |
| ·A.chrysogenum染色体DNA提取方法 | 第56页 |
| ·质粒pANCVHb-lys的构建 | 第56-57页 |
| ·pANCVHb-lys转化A.chrysogenum | 第57页 |
| ·PCR验证 | 第57页 |
| ·PCR验证VHb基因 | 第57页 |
| ·PCR验证hph基因 | 第57页 |
| ·PCR扩增lys基因片段 | 第57页 |
| ·CO差异光谱法分析VHb的表达 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-63页 |
| ·质粒pANCVHb-lys的构建 | 第58-59页 |
| ·质粒pANCVHb的验证 | 第59页 |
| ·质粒pANCVHb-lys的验证 | 第59-60页 |
| ·质粒pANCVHb-lys转化A.chrysogenum | 第60页 |
| ·转化子的头孢菌素C产量分析 | 第60-62页 |
| ·CO差异光谱法分析转化子VHb表达活性 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 全文总结与展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |
