| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 转基因动物乳腺生物反应器研究进展 | 第12-32页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的研究现状 | 第12-14页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的原理 | 第14页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的优势 | 第14-18页 |
| ·乳腺生物反应器表达载体构建的研究 | 第18-23页 |
| ·与乳腺组织特异性表达有关的调控元件 | 第18-21页 |
| ·基于普通质粒的表达载体 | 第21-22页 |
| ·基于人工染色体的表达载体 | 第22-23页 |
| ·基于基因敲入的表达载体 | 第23页 |
| ·制作乳腺生物反应器的转基因方法 | 第23-30页 |
| ·DNA 显微注射法 | 第23-24页 |
| ·原始生殖细胞介导法 | 第24-25页 |
| ·精子载体介导法 | 第25-26页 |
| ·胞内精子注射法 (ICSI) | 第26页 |
| ·逆转录病毒介导法 | 第26页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第26-27页 |
| ·体细胞核移植技术 | 第27页 |
| ·基因打靶技术 | 第27-29页 |
| ·逆转录病毒载体介导法 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-32页 |
| 第二章 α1-AT MAR 增强 RNA 聚合酶 II 依赖的转录调控 | 第32-52页 |
| ·材料和方法 | 第33-47页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·试验方法 | 第36-47页 |
| ·结果 | 第47-51页 |
| ·α1-AT MAR 的 PCR 扩增 | 第47页 |
| ·重组质粒 pMM 的酶切鉴定结果 | 第47页 |
| ·α1-AT MAR 的测序及分析结果 | 第47-48页 |
| ·表达载体 pME 的构建和鉴定 | 第48-49页 |
| ·细胞 G418 抗性筛选 | 第49页 |
| ·荧光显微镜分析 | 第49页 |
| ·EGFP 的半定量 RT-PCR 分析 | 第49-50页 |
| ·ChIP 分析 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第三章 牛β-酪蛋白基因调控序列的克隆及乳腺特异性表达载体的构建 | 第52-63页 |
| ·材料与方法 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·试验方法 | 第53-59页 |
| ·结果 | 第59-61页 |
| ·CN1、CN2 和 CN3 的扩增结果 | 第59页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第59-60页 |
| ·CN3 和加尾信号的拼接及鉴定结果 | 第60-61页 |
| ·CN1 和 CN2 的融合鉴定结果 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 人t-PA 指形区缺失体乳腺表达载体的构建及其在乳腺上皮细胞中的表达 | 第63-76页 |
| ·材料和方法 | 第64-71页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·试验方法 | 第64-71页 |
| ·实验结果 | 第71-74页 |
| ·人 t-PA 指形区缺失体 cDNA 的改造结果 | 第71-72页 |
| ·重组载体 pBC1-TPA、pBC2-TPA、pBCHM1-TPA 和 pBCHM2-TPA 的构建结果 | 第72页 |
| ·转染后乳腺上皮细胞绿色荧光蛋白表达的检测 | 第72-73页 |
| ·转染后乳腺上皮细胞 TPA 蛋白表达的 Western-blot 检测 | 第73-74页 |
| ·阳性细胞的 PCR 鉴定 | 第74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 转染人 t-PA 指形区缺失体乳腺表达载体的牛成纤维细胞系的建立 | 第76-83页 |
| ·材料与方法 | 第76-79页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·方法 | 第77-79页 |
| ·结果 | 第79-82页 |
| ·胎儿成纤维细胞的体外培养生长特点 | 第79-80页 |
| ·细胞 G418 抗性筛选 | 第80页 |
| ·转染后的成纤维细胞 GFP 的检测 | 第80页 |
| ·成纤维细胞稳定克隆株的 RFPCR 鉴定 | 第80-81页 |
| ·成纤维细胞稳定克隆株的 PCR 鉴定 | 第81页 |
| ·成纤维细胞稳定克隆株的 Southern-blot 鉴定 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| 第六章 转 t-PA 基因牛克隆胚的构建及电融合条件的优化 | 第83-91页 |
| ·材料和方法 | 第83-85页 |
| ·试剂与用品 | 第83页 |
| ·牛卵巢的采集、运输及牛卵母细胞的采集 | 第83-84页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养 | 第84页 |
| ·供体细胞的准备 | 第84页 |
| ·卵母细胞的去核、注核操作 | 第84页 |
| ·重组卵的电融合与核移植胚胎的激活 | 第84-85页 |
| ·核移植胚胎的体外培养 | 第85页 |
| ·克隆胚外源基因的检测 | 第85页 |
| ·数据分析 | 第85页 |
| ·结果 | 第85-89页 |
| ·脉冲电场强度对转基因克隆胚融合和发育的影响 | 第85-86页 |
| ·脉冲时程对转基因克隆胚融合和发育的影响 | 第86页 |
| ·电脉冲次数对转基因克隆电融合效果的影响 | 第86页 |
| ·转基因供体细胞 G418 筛选与对牛转基因克隆胚体外发育的影响 | 第86-87页 |
| ·EGFP 在克隆胚中的表达 | 第87-88页 |
| ·克隆胚外源基因的 PCR 检测结果 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简介 | 第101页 |
