| 缩略词表 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 一、BMI-1 基因的研究概况 | 第12-13页 |
| 二、 HaCaT 细胞的基本特性 | 第13-15页 |
| 三、研究目的 | 第15-16页 |
| 第一部分 肝癌中 BMI-1 基因的表达、克隆及构建真核表达载体 | 第16-39页 |
| 实验材料 | 第16-21页 |
| 一、 主要仪器与设备 | 第16-17页 |
| 二、 主要试剂及其制备 | 第17-20页 |
| 三、 组织标本、细胞系、菌株、表达载体 | 第20页 |
| 四、 引物 | 第20-21页 |
| 实验方法 | 第21-31页 |
| 一、 RT-PCR 检测人原发性肝细胞癌组织及肝癌细胞系中BMI-1 的表达情况 | 第21-25页 |
| 二、 人原发性肝细胞癌组织中BMI-1 基因cDNA 的克隆 | 第25-28页 |
| 三、 pcDNA3.0-BMI-1 真核表达载体的构建 | 第28-31页 |
| 实验结果 | 第31-37页 |
| 一、 BMI-1 在人原发性肝细胞癌组织和肝癌细胞系中高表达 | 第31-32页 |
| 二、 人原发性肝细胞癌组织中BMI-1 cDNA 的克隆及测序鉴定 | 第32-35页 |
| 三、pcDNA3.0-BMI-1 真核表达载体的构建及鉴定 | 第35-37页 |
| 讨论 | 第37-39页 |
| 第二部分 肝癌中 BMI-1 基因诱导HaCaT 细胞恶性转化的作用 | 第39-64页 |
| 实验材料 | 第39-46页 |
| 一、 主要仪器与设备 | 第39-40页 |
| 二、 主要试剂及其制备 | 第40-44页 |
| 三、 细胞系、抗体 | 第44-45页 |
| 四、 引物 | 第45-46页 |
| 五、 实验动物 | 第46页 |
| 实验方法 | 第46-52页 |
| 一、 HaCaT 细胞的转染及筛选稳定表达BMI-1 的细胞系 | 第46-49页 |
| 二、 稳定转染细胞的生物学特性分析 | 第49-51页 |
| 三、 实时荧光定量PCR 检测稳定转染细胞的分子表达变化 | 第51-52页 |
| 实验结果 | 第52-64页 |
| 一、 稳定表达BMI-1 的HaCaT 细胞系的建立 | 第52-55页 |
| 二、 HaCaT 细胞系稳定高表达BMI-1 后发生恶性转化 | 第55-60页 |
| 三、 HaCaT 细胞系稳定高表达BMI-1 后的分子表达变化 | 第60-64页 |
| 讨论 | 第64-66页 |
| 一. HaCaT 细胞稳定高表达 BMI-1 基因后发生恶性转化 | 第64-65页 |
| 二. BMI-1 基因诱导 HaCaT 细胞恶性转化的可能机制 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 综述：BMI-1 基因在肿瘤发生中的作用 | 第70-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 附录:载体图 | 第84页 |
