| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-44页 |
| 1 细胞自噬 | 第15-24页 |
| ·细胞自噬的类型 | 第15-16页 |
| ·细胞自噬的分子机制 | 第16-21页 |
| ·细胞自噬的诱导以及物质的选择和包装 | 第17-19页 |
| ·自噬体的形成 | 第19-21页 |
| ·细胞自噬的信号调控 | 第21-23页 |
| ·Tor信号途径 | 第22页 |
| ·Class Ⅰ PI3K/PKB途径 | 第22页 |
| ·Gαi3蛋白 | 第22-23页 |
| ·细胞自噬的形态学观察 | 第23-24页 |
| ·显微镜观察 | 第23页 |
| ·Monodansylcadaverine(MDC)染色 | 第23-24页 |
| ·GFP-LC3定位 | 第24页 |
| 2 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第24-44页 |
| ·稻瘟病菌的侵染循环 | 第25-26页 |
| ·稻瘟病菌附着胞形成 | 第26-27页 |
| ·稻瘟病菌附着胞形成过程中的相关基因 | 第27-33页 |
| ·参与表面识别的基因 | 第27-29页 |
| ·疏水蛋白 | 第27-28页 |
| ·跨膜蛋白 | 第28-29页 |
| ·甘油合成相关基因 | 第29-30页 |
| ·黑色素相关基因 | 第30-31页 |
| ·产孢相关基因 | 第31-33页 |
| ·稻瘟病菌信号传导途径 | 第33-39页 |
| ·环化腺苷酸(cAMP)信号途径 | 第33-34页 |
| ·MAPK(Mitogen-activated protein kinase)信号传导途径 | 第34-37页 |
| ·Ca~(2+)离子途径 | 第37-38页 |
| ·G蛋白途径 | 第38-39页 |
| ·其它致病性相关的基因 | 第39-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-62页 |
| 1 试验菌株 | 第44页 |
| 2 稻瘟病菌的培养基 | 第44-46页 |
| 3 大肠杆菌的培养 | 第46页 |
| 4 酵母分析 | 第46-48页 |
| ·培养酵母的培养基 | 第46页 |
| ·酵母菌落PCR | 第46-47页 |
| ·酵母的高效转化 | 第47-48页 |
| 5 PCR | 第48页 |
| ·常规PCR:PCR反应体系(50μl) | 第48页 |
| ·LD-PCR(长距离PCR):PCR反应体系(50μl): | 第48页 |
| 6 DNA分析 | 第48-51页 |
| 7 质粒提取 | 第51-52页 |
| 8 稻瘟病菌基因组DNA的提取 | 第52-53页 |
| 9 稻瘟病菌产孢培养、孢子收集和附着胞诱导培养 | 第53页 |
| 10 稻瘟病菌RNA提取和分析 | 第53-55页 |
| 11 稻瘟病菌原生质体的制备与转化 | 第55-56页 |
| ·原生质体的制备 | 第55页 |
| ·转化 | 第55-56页 |
| 12 稻瘟病菌基因组DNA Southern杂交(DIG) | 第56-58页 |
| ·DIG-DNA标记 | 第56页 |
| ·基因组DNA的消化、电泳及变性 | 第56-57页 |
| ·DNA转膜 | 第57页 |
| ·Southern杂交过程 | 第57-58页 |
| ·免疫显色 | 第58页 |
| 13 稻瘟病菌附着胞的诱导 | 第58-59页 |
| 14 水稻(大麦)离体接种 | 第59页 |
| 15 水稻(大麦)苗喷雾接种 | 第59页 |
| 16 稻瘟病菌的有性杂交 | 第59页 |
| 17 稻瘟菌菌侵染过程的组织病理学观察 | 第59-60页 |
| 18 稻瘟病菌染色观察 | 第60页 |
| ·脂质体的观察 | 第60页 |
| ·糖原染色 | 第60页 |
| 19 细胞自噬现象的观察 | 第60页 |
| 20 荧光表达的观察 | 第60-61页 |
| 21 菌落生长速度以及产孢量 | 第61页 |
| 22 附着胞形成 | 第61页 |
| 23 透射电镜样品制备方法 | 第61-62页 |
| 第三章 稻瘟病菌细胞自噬基因MgATG1功能的研究 | 第62-93页 |
| 1 MgATG1基因的分离和克隆 | 第62-65页 |
| 2 MgATG1基因同源性分析 | 第65-67页 |
| 3 MgATG1基因的细胞定位 | 第67-70页 |
| ·通用载体pBSHPH1的构建 | 第67页 |
| ·GFP-MgATG1融合载体的构建 | 第67-69页 |
| ·荧光观察 | 第69-70页 |
| 4 MgATG1基因缺失突变体的获得 | 第70-75页 |
| ·MgATG1基因敲除载体的构建 | 第70页 |
| ·Δmgatg1突变体的获得 | 第70-72页 |
| ·互补载体的构建 | 第72-73页 |
| ·qRT-PCR和RT-PCR | 第73-75页 |
| 5 突变体Δmgatg1的细胞自噬过程中断 | 第75-77页 |
| 6 突变体表型分析 | 第77-85页 |
| ·突变体Δmgatg1的菌落形态 | 第77页 |
| ·突变体Δmgatg1的产孢量下降 | 第77-79页 |
| ·交配试验 | 第79页 |
| ·孢子萌发和附着胞形成 | 第79-80页 |
| ·脂质体含量减少 | 第80-83页 |
| ·糖原的移动 | 第83页 |
| ·附着胞膨压下降 | 第83-85页 |
| 7 突变体Δmgatg1致病性丧失 | 第85-88页 |
| ·离体接种 | 第85页 |
| ·喷雾接种 | 第85-88页 |
| ·病斑数统计和分级 | 第88页 |
| 8 Δmgatg1致病机丧失的细胞学观察 | 第88-91页 |
| 9 本章小结 | 第91-92页 |
| 附:研究稻瘟病菌MgATG1基因试验中的引物 | 第92-93页 |
| 第四章 稻瘟病菌细胞自噬基因MgATG5功能的研究 | 第93-112页 |
| 1 MgATG5基因的分离和克隆 | 第93-94页 |
| 2 MgATG5基因同源性分析 | 第94-95页 |
| 3 基因缺失突变体和恢复突变体的获得 | 第95-100页 |
| ·MgATG5基因置换载体的构建 | 第95页 |
| ·基因缺失突变体Δmgatg5的获得 | 第95-97页 |
| ·互补载体的构建 | 第97-98页 |
| ·载体pBAR-ATG5 | 第97页 |
| ·载体pNGA5B | 第97-98页 |
| ·载体pNA5GB | 第98页 |
| ·互补突变体的获得 | 第98-99页 |
| ·反转录PCR | 第99-100页 |
| 4 MgATG5基因细胞内GFP定位 | 第100-101页 |
| 5 突变体Δmgatg5表型分析 | 第101-104页 |
| ·菌落形态的变化 | 第101-102页 |
| ·产孢量下降 | 第102页 |
| ·孢子萌发和附着胞形成延迟 | 第102页 |
| ·附着胞膨压显著下降 | 第102-103页 |
| ·突变体Δmgatg5不能形成子囊壳 | 第103-104页 |
| 6 突变体Δmgatg5细胞自噬过程被阻断 | 第104-106页 |
| ·细胞自噬过程中断 | 第104页 |
| ·突变体Δmgatg5对饥饿敏感 | 第104-106页 |
| 7 致病性分析 | 第106-108页 |
| ·离体接种 | 第106页 |
| ·喷雾接种 | 第106-108页 |
| 8 Δmgatg5致病性丧失的细胞学观察 | 第108-110页 |
| 9 本章小结 | 第110-111页 |
| 附:研究稻瘟病菌MgATG5基因试验中的引物 | 第111-112页 |
| 第五章 全文讨论与今后的工作 | 第112-119页 |
| 1 全文讨论 | 第112-115页 |
| ·细胞自噬过程是进化上保守的过程 | 第112-113页 |
| ·细胞自噬过程是真菌发育所必须的过程 | 第113页 |
| ·细胞自噬是物质周转所必须的过程 | 第113-114页 |
| ·细胞自噬是稻瘟病菌致病所必须的过程 | 第114-115页 |
| 2 本研究的创新点 | 第115页 |
| 3 今后的研究工作 | 第115-119页 |
| 参考文献 | 第119-127页 |
