| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-32页 |
| 1 稻瘟病研究进展 | 第15-22页 |
| ·稻瘟病菌遗传的多样性 | 第15-16页 |
| ·稻瘟病菌致病机理的研究 | 第16-17页 |
| ·寄主和病原物相互作用的分子基础 | 第17-18页 |
| ·稻瘟病抗性基因的定位和克隆 | 第18-21页 |
| ·展望 | 第21-22页 |
| 2 农杆菌介导法及其在水稻基因工程中的应用 | 第22-29页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化机理 | 第22-23页 |
| ·农杆菌介导水稻遗传转化的影响因素 | 第23-26页 |
| ·水稻基因型 | 第23页 |
| ·菌株和载体 | 第23-24页 |
| ·转化受体 | 第24页 |
| ·酚类物质 | 第24-25页 |
| ·选择标记基因 | 第25页 |
| ·启动子 | 第25页 |
| ·培养基和共培养 | 第25页 |
| ·报告基因 | 第25-26页 |
| ·农杆菌转化系统的优缺点 | 第26页 |
| ·农杆菌介导法在水稻遗传改良上的应用 | 第26-29页 |
| ·抗虫性改良 | 第26-27页 |
| ·抗病性改良 | 第27-28页 |
| ·抗除草剂 | 第28页 |
| ·抗逆基因工程应用 | 第28页 |
| ·品质改良应用 | 第28页 |
| ·提高水稻产量的应用 | 第28-29页 |
| 3 转基因植株的分子检测 | 第29-31页 |
| ·报告基因的酶法检测 | 第29页 |
| ·RT-PCR检测 | 第29页 |
| ·PCR检测 | 第29-30页 |
| ·Southern杂交 | 第30页 |
| ·Northern杂交 | 第30页 |
| ·Western杂交 | 第30-31页 |
| 4 研究内容和目标 | 第31-32页 |
| ·研究内容 | 第31页 |
| ·目标 | 第31-32页 |
| 第二章 籼稻高效遗传转化体系的建立与Pi9因的转化 | 第32-54页 |
| 1 材料和方法 | 第32-39页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·菌株和质粒 | 第32-33页 |
| ·试剂和溶液 | 第33-34页 |
| ·酶等试剂 | 第33页 |
| ·质粒提取液 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·质粒DNA的小量提取(碱裂解法) | 第35-36页 |
| ·质粒的鉴定 | 第36页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第36-37页 |
| ·工程农杆菌的制备 | 第37页 |
| ·Pi9基因对籼稻转化的基本技术路线 | 第37-39页 |
| ·愈伤组织诱导及继代 | 第38页 |
| ·工程农杆菌与水稻愈伤组织的共培养 | 第38页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选和幼苗分化 | 第38-39页 |
| ·壮苗、驯化及移栽 | 第39页 |
| ·调查指标 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-50页 |
| ·质粒pc1301-Pi9的鉴定 | 第39-40页 |
| ·不同培养基对籼稻愈伤组织诱导的影响 | 第40-41页 |
| ·ABA对愈伤组织诱导的影响 | 第41-42页 |
| ·愈伤组织在NB和L3培养基中的继代比较 | 第42-43页 |
| ·不同品种愈伤组织在L3中的继代分析 | 第43-44页 |
| ·共培养各因素对转化的影响 | 第44-45页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)对转化的影响 | 第44-45页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第45页 |
| ·不同菌液浓度对愈伤组织转化的影响 | 第45页 |
| ·不同品种愈伤组织在S_(40)中的筛选 | 第45-46页 |
| ·抗性愈伤组织的分化与植株再生 | 第46-48页 |
| ·不同激素配比对愈伤组织分化率的影响 | 第48页 |
| ·优化的转化体系 | 第48-50页 |
| 3 小结与讨论 | 第50-54页 |
| ·NB培养基适于籼稻的诱导 | 第50页 |
| ·品种间的遗传转化差异 | 第50页 |
| ·愈伤组织继代对转化的影响 | 第50页 |
| ·共培养对转化的影响 | 第50-51页 |
| ·抗性愈伤组织继代对转化的影响 | 第51-52页 |
| ·预分化对籼稻转化的影响 | 第52页 |
| ·分化对出苗率的影响 | 第52页 |
| ·潮霉素B在转化中的作用 | 第52-53页 |
| ·建立了农杆菌介导的高效籼稻转化体系 | 第53-54页 |
| 第三章 转Pi9基因水稻植株的分子检测及稻瘟病抗性鉴定 | 第54-67页 |
| 1 材料和方法 | 第54-58页 |
| ·水稻材料 | 第54页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·试剂及溶液 | 第54-55页 |
| ·酶等试剂 | 第54页 |
| ·GUS组织化学染色液 | 第54页 |
| ·DNA提取液 | 第54-55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·水稻DNA的提取 | 第55-56页 |
| ·水稻DNA大量提取 | 第55页 |
| ·水稻DNA微量提取 | 第55-56页 |
| ·水稻RNA提取(Trizol试剂法) | 第56页 |
| ·GUS活性测定 | 第56页 |
| ·PCR检测 | 第56-57页 |
| ·PCR反应体系(总体积20ul) | 第57页 |
| ·PCR反应程序 | 第57页 |
| ·RT-PCR检测 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR反应体系(总体积25ul) | 第57-58页 |
| ·RT-PCR反应程序 | 第58页 |
| ·T2代转基因苗的稻瘟病抗性鉴定 | 第58页 |
| ·接种孢子的准备 | 第58页 |
| ·T2代植株的抗性鉴定 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-66页 |
| ·T1代植株的生化和分子检测 | 第58-60页 |
| ·报告基因表达检测 | 第58-59页 |
| ·T1代植株的PCR检测 | 第59-60页 |
| ·T1代植株的RT-PCR检测 | 第60页 |
| ·T2代植株遗传性鉴定 | 第60-63页 |
| ·GUS活性检测 | 第60-62页 |
| ·T2代植株的PCR检测 | 第62-63页 |
| ·T2代植株的RT-PCR检测 | 第63页 |
| ·T2代植株的稻瘟病抗性鉴定 | 第63-66页 |
| ·致病稻瘟病菌小种的筛选 | 第63-65页 |
| ·T2代植株的稻瘟病抗性鉴定 | 第65-66页 |
| 3 结论和讨论 | 第66-67页 |
| 第四章 Pi2/9位点的进化分析 | 第67-74页 |
| 1 材料和方法 | 第67-68页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·基因测序及序列比较分析 | 第67-68页 |
| ·序列进化分析及系统进化树绘制 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-72页 |
| ·Pi2/9位点的序列分析 | 第68-70页 |
| ·大多数Pi2/9位点NBS-LRR基因在N端都有一个二相内含子 | 第70-71页 |
| ·Pi2/9位点NBS-LRR基因属于同一进化树 | 第71-72页 |
| 3 结论与讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 结论与创新 | 第74-76页 |
| 1 结论 | 第74-75页 |
| 2 创新 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 附录A:45A15的NBS序列 | 第88-90页 |
| 附录B:30A22的NBS序列 | 第90-95页 |
| 附录C:34K08的NBS序列 | 第95-98页 |
| 附录D:CC的NBS序列 | 第98-103页 |
| 附录E:本文略缩词表 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105页 |
