| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-23页 |
| 实验材料 | 第23-28页 |
| 实验方法 | 第28-33页 |
| 1.大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第28页 |
| 2.大肠杆菌质粒DNA大量提取 | 第28页 |
| 3.链霉菌质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 4.链霉菌总DNA的提取 | 第28-29页 |
| 5.大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 6.质粒DNA转化大肠杆菌 | 第29页 |
| 7.DNA酶切和连接 | 第29页 |
| 8.DNA电泳和片段回收 | 第29-30页 |
| 9.T_4 DNA聚合酶补平试验 | 第30页 |
| 10.PCR实验 | 第30页 |
| 11.接合转移实验 | 第30-31页 |
| 12.黑暗链霉菌发酵及检测操作的实验方法 | 第31页 |
| ·发酵流程 | 第31页 |
| ·抗生素组分检测 | 第31页 |
| 13.Southern blot杂交 | 第31-33页 |
| ·DNA从凝胶转移至尼龙膜 | 第31-32页 |
| ·探针标记 | 第32页 |
| ·Southern杂交 | 第32-33页 |
| 结果与讨论 | 第33-65页 |
| 第一部分 黑暗链霉菌妥布霉素生物合成基因tbmA的功能研究 | 第33-42页 |
| 1.tbmA基因的功能研究 | 第34-40页 |
| ·阻断载体的构建 | 第34-37页 |
| ·接合转移实验 | 第37页 |
| ·单交换基因阻断菌株的获得 | 第37页 |
| ·基因阻断菌株体内游离质粒的考察 | 第37-38页 |
| ·阻断变株的Southern blot杂交验证 | 第38-39页 |
| ·阻断变株的发酵组分分析 | 第39-40页 |
| ·基因重组菌株稳定性考察 | 第40页 |
| 2.讨论 | 第40-42页 |
| 第二部分 S.tenebrarius H6中妥布霉素生物合成基因簇初步研究 | 第42-65页 |
| 1.G片段的研究 | 第42-58页 |
| ·G片段的初步研究 | 第42-49页 |
| ·BamHI 9.0kb-G片段亚克隆和酶切图谱分析 | 第42-43页 |
| ·克隆片段功能的初步研究 | 第43-49页 |
| ·G片段阻断载体的构建 | 第43-47页 |
| ·接合转移实验 | 第47页 |
| ·基因阻断菌株的获得 | 第47页 |
| ·阻断变株的发酵组分分析 | 第47-48页 |
| ·阻断变株H6(pSPU106)的Southern blot杂交验证 | 第48-49页 |
| ·基因阻断菌株H6(pSPU106)稳定性考察 | 第49页 |
| ·G片段的进一步序列分析 | 第49-58页 |
| ·G片段的酶谱分析及亚克隆 | 第49-50页 |
| ·序列测定及DNA序列分析 | 第50-54页 |
| ·序列测定 | 第50-51页 |
| ·测序结果的FramePlot分析和序列同源性比较 | 第51-54页 |
| ·克隆基因功能的初步分析 | 第54-58页 |
| ·阻断载体的构建 | 第54-56页 |
| ·单交换基因阻断菌株的获得 | 第56页 |
| ·阻断变株的Southern blot杂交验证 | 第56-57页 |
| ·阻断变株的发酵组分分析 | 第57-58页 |
| 2.E片段的初步研究 | 第58-62页 |
| ·BamHI 9.0kb-E片段亚克隆和酶切图谱分析 | 第59页 |
| ·克隆片段功能的初步研究 | 第59-62页 |
| ·E片段阻断载体的构建及酶切鉴定 | 第59-62页 |
| ·基因阻断菌株的获得 | 第62页 |
| ·阻断变株的发酵组分分析 | 第62页 |
| ·kb连锁区域与已报道的13.8kb妥布霉素生物合成基因簇的位置关系 | 第62-63页 |
| 4.讨论 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
