| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-64页 |
| 第一章 核移植和 ES 细胞研究进展 | 第18-64页 |
| ·核移植研究进展 | 第18-37页 |
| ·核移植研究历史 | 第18-21页 |
| ·胚胎细胞核移植研究状况 | 第18-19页 |
| ·体细胞核移植研究状况 | 第19-20页 |
| ·继代核移植研究状况 | 第20-21页 |
| ·异种动物核移植研究状况 | 第21页 |
| ·不同供体细胞在核移植中的应用 | 第21-23页 |
| ·卵母细胞去核方法及其影响 | 第23-24页 |
| ·核移植克隆胚的不同激活方法及原理 | 第24-26页 |
| ·核移植克隆胚的培养体系 | 第26-27页 |
| ·核移植过程中的核质互作 | 第27-32页 |
| ·端粒与体细胞核移植 | 第32-33页 |
| ·线粒体与体细胞核移植 | 第33页 |
| ·供体细胞与核移植效率 | 第33-37页 |
| ·细胞周期与核移植克隆胚的发育 | 第33-35页 |
| ·血清饥饿与核移植克隆胚发育 | 第35-36页 |
| ·供体细胞的分化程度与核移植克隆胚发育 | 第36-37页 |
| ·ES 细胞的研究进展 | 第37-47页 |
| ·LIF 在ES 细胞分离培养中的应用 | 第37-39页 |
| ·LIF 维持ES 细胞未分化状态的机理 | 第39-40页 |
| ·ES 细胞同成体干细胞的差异 | 第40-44页 |
| ·人ES 细胞特点 | 第44-45页 |
| ·孤雌生殖ES 细胞研究进展 | 第45-46页 |
| ·细胞因子和培养环境对ES 细胞的影响 | 第46-47页 |
| ·治疗性克隆研究进展 | 第47-64页 |
| ·治疗性克隆的研究现状 | 第47-48页 |
| ·治疗性克隆同再生性克隆的差异 | 第48-49页 |
| ·再生性克隆目前存在的问题 | 第49-56页 |
| ·动物克隆的低效率 | 第49-51页 |
| ·克隆动物的病态变化 | 第51-54页 |
| ·动物克隆中的基因错误重构 | 第54-56页 |
| ·治疗性克隆的应用基础 | 第56-60页 |
| ·RNA 干扰在 ES 细胞定向诱导分化中的应用 | 第60-62页 |
| ·绿色荧光蛋白在 ES 细胞研究中的应用 | 第62-63页 |
| ·治疗性克隆目前存在的问题及展望 | 第63-64页 |
| 前言 | 第64页 |
| 第二部分 实验研究 | 第64-144页 |
| 第二章 小鼠卵母细胞的激活 | 第66-78页 |
| ·材料与方法 | 第66-69页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-69页 |
| ·大鼠心肌条件培养基的制备 | 第67页 |
| ·小鼠输卵管上皮细胞饲养层的制备 | 第67页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备 | 第67-68页 |
| ·小鼠卵母细胞的孤雌激活和培养 | 第68页 |
| ·小鼠孤雌胚 ES 细胞集落的分离 | 第68页 |
| ·小鼠孤雌胚 ES 细胞集落的培养与鉴定 | 第68-69页 |
| ·统计分析 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-74页 |
| ·心肌细胞的形态学观察 | 第69页 |
| ·小鼠孤雌胚体外发育结果 | 第69页 |
| ·小鼠孤雌胚激活率的体外发育差异 | 第69-70页 |
| ·小鼠孤雌胚2-细胞率的体外发育差异 | 第70-71页 |
| ·小鼠孤雌胚桑椹胚率的体外发育差异 | 第71页 |
| ·小鼠孤雌胚囊胚率的体外发育差异 | 第71-72页 |
| ·小鼠孤雌胚 ES 细胞集落的分离培养结果 | 第72-73页 |
| ·小鼠孤雌胚 ES 细胞集落的检测结果 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·乙醇和 SrCl_2 在卵母细胞孤雌激活中的应用 | 第74-75页 |
| ·饲养层在胚胎体外发育过程中的作用 | 第75-76页 |
| ·心肌条件培养基在孤雌胚 ES 细胞集落分离中的应用 | 第76页 |
| ·孤雌胚 ES 细胞集落在体外培养中的变化 | 第76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第三章 LIF 与心肌条件培养基在小鼠 ES 细胞分离中的差异比较 | 第78-88页 |
| ·材料与方法 | 第78-80页 |
| ·实验材料 | 第78-79页 |
| ·实验方法 | 第79-80页 |
| ·大鼠心肌条件培养基的制备 | 第79页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备 | 第79页 |
| ·小鼠胚胎的获取 | 第79页 |
| ·小鼠 ES 细胞的分离 | 第79页 |
| ·小鼠 ES 细胞的鉴定 | 第79-80页 |
| ·小鼠 ES 细胞的核型分析 | 第80页 |
| ·统计分析 | 第80页 |
| ·结果 | 第80-83页 |
| ·3.5 d 小鼠胚胎形态学观察 | 第80页 |
| ·小鼠 ES 细胞的分离与鉴定结果 | 第80-81页 |
| ·心肌条件培养基和 LIF 条件液对小鼠 ICM 分离成功率的影响 | 第81页 |
| ·心肌条件培养基和 LIF 条件液在小鼠 ICM 分离时间上的差异 | 第81-82页 |
| ·心肌条件培养基和LIF 条件液对小鼠ES 细胞自发分化状态的影响 | 第82-83页 |
| ·小鼠ES 细胞在心肌条件培养基和LIF 条件液中的核型差异 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 第四章 小鼠卵母细胞去核时间对体细胞克隆胚的影响 | 第88-94页 |
| ·材料与方法 | 第88-89页 |
| ·实验材料 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89页 |
| ·小鼠输卵管上皮细胞饲养层的制备 | 第89页 |
| ·小鼠卵母细胞的获取 | 第89页 |
| ·小鼠卵丘细胞的培养 | 第89页 |
| ·小鼠卵母细胞的去核 | 第89页 |
| ·小鼠卵母细胞的注核及克隆胚培养 | 第89页 |
| ·统计分析 | 第89页 |
| ·结果 | 第89-91页 |
| ·小鼠卵母细胞去核时间对去核成功率的影响 | 第89-90页 |
| ·小鼠卵母细胞去核时间对克隆胚激活率的影响 | 第90页 |
| ·小鼠卵母细胞去核时间对克隆胚囊胚率的影响 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-94页 |
| 第五章 卵丘细胞核移植克隆胚及其 ES 细胞 | 第94-104页 |
| ·材料与方法 | 第94-96页 |
| ·实验材料 | 第94-95页 |
| ·实验方法 | 第95-96页 |
| ·大鼠心肌条件培养基制备 | 第95页 |
| ·小鼠输卵管上皮细胞饲养层的制备 | 第95页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备 | 第95页 |
| ·小鼠卵母细胞的获取 | 第95页 |
| ·小鼠卵丘细胞的培养 | 第95页 |
| ·小鼠卵丘细胞的核移植 | 第95页 |
| ·核移植重构囊胚的培养 | 第95页 |
| ·克隆胚 ES 细胞集落的培养与鉴定 | 第95-96页 |
| ·统计分析 | 第96页 |
| ·结果 | 第96-101页 |
| ·小鼠卵丘细胞的核移植结果 | 第96页 |
| ·核移植克隆胚体外发育结果 | 第96-98页 |
| ·核移植克隆胚中 ES 细胞集落分离培养结果 | 第98页 |
| ·核移植克隆胚中 ES 细胞集落鉴定结果 | 第98-101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| ·小结 | 第103-104页 |
| 第六章 成纤维细胞核移植克隆胚及其 ES 细胞 | 第104-112页 |
| ·材料与方法 | 第104-105页 |
| ·实验材料 | 第104页 |
| ·实验方法 | 第104-105页 |
| ·大鼠心肌条件培养基的制备 | 第104页 |
| ·小鼠皮肤成纤维细胞的培养 | 第104-105页 |
| ·小鼠输卵管上皮细胞饲养层的制备 | 第105页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备 | 第105页 |
| ·小鼠卵母细胞的获取及培养 | 第105页 |
| ·小鼠卵母细胞的核移植 | 第105页 |
| ·核移植克隆胚的培养 | 第105页 |
| ·克隆胚中 ES 细胞集落的培养与鉴定 | 第105页 |
| ·统计分析 | 第105页 |
| ·结果 | 第105-108页 |
| ·小鼠卵母细胞的去核结果 | 第105页 |
| ·核移植克隆胚的发育结果 | 第105-107页 |
| ·核移植克隆胚 ES 细胞集落的分离培养结果 | 第107-108页 |
| ·ES 细胞集落碱性磷酸酶鉴定与核型分析结果 | 第108页 |
| ·讨论 | 第108-110页 |
| ·小结 | 第110-112页 |
| 第七章 血液淋巴细胞核移植克隆胚及其 ICM 细胞 | 第112-120页 |
| ·材料与方法 | 第112-113页 |
| ·实验材料 | 第112页 |
| ·实验方法 | 第112-113页 |
| ·小鼠血液淋巴细胞的分离 | 第112页 |
| ·小鼠输卵管上皮细胞饲养层的制备 | 第112-113页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备 | 第113页 |
| ·大鼠心肌条件培养基的制备 | 第113页 |
| ·小鼠卵母细胞的获取 | 第113页 |
| ·小鼠淋巴细胞的核移植 | 第113页 |
| ·核移植克隆胚的培养 | 第113页 |
| ·统计分析 | 第113页 |
| ·结果 | 第113-116页 |
| ·淋巴细胞核移植克隆胚发育结果 | 第113页 |
| ·淋巴细胞核移植重构囊胚中 ICM 分离结果 | 第113-116页 |
| ·讨论 | 第116-118页 |
| ·小结 | 第118-120页 |
| 第八章 体细胞克隆胚 ES 细胞诱导分化为上皮细胞 | 第120-132页 |
| ·材料与方法 | 第120-122页 |
| ·实验材料 | 第120页 |
| ·实验方法 | 第120-122页 |
| ·小鼠皮肤上皮皮细胞条件培养基的制备 | 第120-121页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备 | 第121页 |
| ·大鼠心肌条件培养基的制备 | 第121页 |
| ·克隆胚 ES 细胞的诱导分化 | 第121页 |
| ·上皮细胞的鉴定 | 第121页 |
| ·上皮细胞的培养 | 第121页 |
| ·细胞凋亡-Hoechst 荧光染色试剂盒检测 | 第121-122页 |
| ·上皮细胞生长曲线的测定 | 第122页 |
| ·统计分析 | 第122页 |
| ·结果 | 第122-128页 |
| ·上皮细胞的形态特征 | 第122页 |
| ·上皮细胞增殖活性的凋亡检测结果 | 第122-123页 |
| ·上皮细胞广谱角蛋白免疫组化鉴定结果 | 第123-124页 |
| ·不同代数对上皮细胞生长曲线变化的影响 | 第124-125页 |
| ·冻存与复苏对上皮细胞生长的影响 | 第125-126页 |
| ·传代对上皮细胞纯度的影响 | 第126页 |
| ·传代对上皮细胞稳定性的影响 | 第126-127页 |
| ·表皮生长因子对上皮细胞生长的影响 | 第127页 |
| ·血清浓度对上皮细胞生长形态的影响 | 第127-128页 |
| ·讨论 | 第128-129页 |
| ·小结 | 第129-132页 |
| 第九章 体细胞克隆胚 ES 细胞诱导分化为心肌细胞 | 第132-144页 |
| ·材料与方法 | 第132-134页 |
| ·实验材料 | 第132-133页 |
| ·实验方法 | 第133-134页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备 | 第133页 |
| ·大鼠心肌条件培养基的制备 | 第133页 |
| ·克隆胚 ES 细胞的培养和诱导分化 | 第133页 |
| ·心肌细胞的鉴定 | 第133-134页 |
| ·心肌细胞的 PAS 糖原染色 | 第134页 |
| ·细胞凋亡-Hoechst 荧光染色试剂盒检测 | 第134页 |
| ·心肌细胞生长曲线的测定 | 第134页 |
| ·统计分析 | 第134页 |
| ·结果 | 第134-140页 |
| ·拟胚体的形态变化 | 第134页 |
| ·心肌细胞的形态学观察 | 第134-136页 |
| ·心肌细胞的免疫细胞化学鉴定结果 | 第136页 |
| ·心肌细胞的 PAS 染色鉴定结果 | 第136-137页 |
| ·心肌细胞的增殖活力检测结果 | 第137-138页 |
| ·冻存复苏对心肌细胞生长性能的影响 | 第138-139页 |
| ·传代对心肌细胞生长曲线的影响 | 第139页 |
| ·传代部位对心肌细胞纯度的影响 | 第139-140页 |
| ·讨论 | 第140-142页 |
| ·小结 | 第142-144页 |
| 结论 | 第144-146页 |
| 致谢 | 第146-148页 |
| 参考文献 | 第148-178页 |
| 作者简介 | 第178页 |
