| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 前言 | 第6-19页 |
| 一 文献综述 | 第6-17页 |
| (一) 骨骼的发育及其影响因素 | 第6-7页 |
| (二) 成骨细胞分化相关转录因子的研究及进展 | 第7-12页 |
| 1 Cbfa1的发现以及研究进展 | 第8-10页 |
| 2 Osx的发现以及研究进展 | 第10-12页 |
| (三) MLO-Y4细胞简介 | 第12页 |
| (四) 分离特异表达基因的方法研究以及进展 | 第12-17页 |
| 二 本论文的研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 材料和方法 | 第19-35页 |
| 一 实验材料 | 第19-20页 |
| 1 细胞及其培养试剂 | 第19页 |
| 2 细胞转染以及RNA制备试剂 | 第19页 |
| 3 SSH相关试剂以及药品 | 第19页 |
| 4 主要仪器及设备 | 第19-20页 |
| 二 实验方法 | 第20-35页 |
| 1 MLO-Y4细胞的培养 | 第20-21页 |
| 2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第21页 |
| 3 感受态细菌的转化及α互补筛选 | 第21页 |
| 4 转染质粒的制备 | 第21-23页 |
| 5 MLO-Y4细胞的转染 | 第23-24页 |
| 6 RNA的制备及电泳检测 | 第24-25页 |
| 7 RT-PCR | 第25-26页 |
| 8 PCR-Selected subtraction(抑制性消减杂交SSH) | 第26-31页 |
| 9 Virtual Northern blot | 第31-35页 |
| 结果与分析 | 第35-46页 |
| 一 检测转染效率的RT-PCR结果 | 第35页 |
| 二 抑制性消减杂交(SSH)的结果 | 第35-46页 |
| 1 PCR法合成dsDNA | 第35-36页 |
| 2 回收产物经过RsaⅠ酶切后电泳结果 | 第36-37页 |
| 3 两次PCR的结果 | 第37页 |
| 4 检测探针制备及Virtual Northern blot结果 | 第37-38页 |
| 5 构建消减文库以及测序结果 | 第38-43页 |
| 6 进一步筛选的结果 | 第43-44页 |
| 7 在MLO-Y4和另两种成骨细胞中Cbfa1对Osx作用 | 第44-46页 |
| 讨论 | 第46-50页 |
| 一 MLO-Y4细胞的转染 | 第46页 |
| 二 SSH成功的必要条件 | 第46-48页 |
| 三 测序结果分析 | 第48页 |
| 四 Cbfa1在两种成骨细胞中诱导Osx的表达 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 英文摘要 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 独创性声明 | 第58页 |
