| 引言 | 第1-7页 |
| 技术路线 | 第7-8页 |
| 第一章 CD59锚定蛋白对CD3介导Jurkat细胞活化信号转导中的协同效应 | 第8-26页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| ·材料和方法 | 第10-17页 |
| ·材料 | 第10-11页 |
| ·方法 | 第11-17页 |
| ·Jurkat细胞的复苏与培养 | 第11-12页 |
| ·PA317细胞的培养 | 第12页 |
| ·转染包装细胞系PA317、收集病毒感染Jurkat细胞 | 第12-13页 |
| ·稳定转染细胞克隆的建立 | 第13-14页 |
| ·RT-PCR检测Jurkat细胞CD59的表达水平 | 第14-17页 |
| ·功能检测 | 第17-18页 |
| ·MTT检测细胞增殖 | 第17页 |
| ·Jurkat细胞ZAP-70酪氨酸磷酸化水平的检测 | 第17页 |
| ·激光共聚焦检测细胞胞浆内钙离子浓度变化 | 第17-18页 |
| ·统计学分析 | 第18页 |
| ·结果 | 第18-25页 |
| ·重组质粒转染Jurkat细胞的筛选及鉴定 | 第18-22页 |
| ·功能检测结果 | 第22-25页 |
| ·小结 | 第25-26页 |
| 第二章 人CD3ξRNAi逆转录病毒载体的构建及鉴定 | 第26-42页 |
| 摘要 | 第26-27页 |
| Abstract | 第27-28页 |
| ·材料与方法 | 第28-37页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-35页 |
| ·载体的选择 | 第28-29页 |
| ·由DNA转录生成siRNA的策略 | 第29-31页 |
| ·靶向CD3ξ基因寡核苷酸的设计 | 第31-32页 |
| ·寡核苷酸链的退火 | 第32页 |
| ·pSUPER质粒的酶切与胶回收 | 第32-34页 |
| ·pSUPER质粒的酶切大片段与退火双链的连接 | 第34页 |
| ·TSS法将连接产物分别转化感受态大肠杆菌JM109 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的抽提与纯化 | 第35页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第35-37页 |
| ·转染病毒包装细胞PA317 | 第37页 |
| ·统计学分析 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-41页 |
| ·退火双链 | 第37页 |
| ·pSUPER空质粒 | 第37-38页 |
| ·pSUPER空质粒的双酶切片段 | 第38-39页 |
| ·重组载体的PCR鉴定 | 第39页 |
| ·重组载体的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组载体的序列鉴定 | 第40-41页 |
| ·转染病毒包装细胞PA317 | 第41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 沉默CD3ξ后对锚定蛋白CD59胞内跨膜信号转导的影响 | 第42-49页 |
| 摘要 | 第42-43页 |
| Abstract | 第43-44页 |
| ·材料和方法 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·质粒的扩增 | 第45页 |
| ·Jurkat细胞系的培养与传代 | 第45页 |
| ·重组质粒的转染与筛选 | 第45页 |
| ·RT-PCR检测CD3ξmRNA的表达水平 | 第45页 |
| ·MTT比色法检测Jurkat细胞增殖活性 | 第45-46页 |
| ·ZAP-70酪氨酸磷酸化水平的检测 | 第46页 |
| ·ELISA定量检测IL-2水平 | 第46页 |
| ·统计学处理 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR检测CD3ξmRNA的干扰效果 | 第47页 |
| ·MTT检测各组Jurkat细胞增殖情况 | 第47-48页 |
| ·Jurkat细胞ZAP-70酪氨酸磷酸化水平的变化 | 第48页 |
| ·IL-2表达水平的变化 | 第48-49页 |
| 小结 | 第49-50页 |
| 讨论 | 第50-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 综述 | 第57-70页 |
| 综述的参考文献 | 第66-70页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-76页 |
| 附录1 试剂的配制 | 第71-75页 |
| 附录2 CD3ξ基因序列 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
