| 图形目录 | 第1-11页 |
| 表格目录 | 第11-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| 英文摘要 | 第16-20页 |
| 前言 | 第20-23页 |
| 第一章 枯草杆菌(Bacillus subtilis)转化的研究 | 第23-52页 |
| 摘要 | 第24-25页 |
| 1 引言 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-37页 |
| 2．1 材料 | 第27-33页 |
| 2．2 实验方法 | 第33-37页 |
| 3 结果 | 第37-45页 |
| 3．1 短小芽孢杆菌UN-31-C-42和枯草杆菌WB600生长曲线的绘制 | 第37-38页 |
| 3．2 短小芽孢杆菌UN-31-C-42和枯草杆菌WB600对抗生素的敏感性分析 | 第38-39页 |
| 3．3 pSUGV4中Kan基因的序列分析 | 第39-42页 |
| 3．3．1 卡那霉素抗性基因的克隆 | 第39-42页 |
| 3．3．2 卡那霉素抗性基因的序列测定与分析 | 第42页 |
| 3．4 枯草芽孢杆菌WB600转化方法的研究 | 第42-45页 |
| 3．4．1 枯草杆菌WB600感受态转化法的研究 | 第42页 |
| 3．4．2 枯草杆菌WB600原生质体转化法的研究 | 第42-43页 |
| 3．4．3 枯草杆菌WB600电转化法的研究 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4．1 感受态转化法 | 第45-46页 |
| 4．2 原生体转化法 | 第46-47页 |
| 4．3 电转化法 | 第47页 |
| 4．4 三种转化方法的比较 | 第47-48页 |
| 5 参考文献 | 第48-52页 |
| 第二章 芽孢杆菌基因启动子的克隆，序列分析与功能鉴定 | 第52-81页 |
| 摘要 | 第53-54页 |
| 1．引言 | 第54-57页 |
| 2．材料与方法 | 第57-63页 |
| 2．1 实验材料 | 第57-60页 |
| 2．2 实验方法 | 第60-63页 |
| 3．结果 | 第63-76页 |
| 3．1 短小芽孢杆菌UN-31-C-42基因启动子的克隆 | 第63-69页 |
| 3．1．1 利用启动子探针型载体pSUPV4分离启动子的策略 | 第63页 |
| 3．1．2 短小芽孢杆菌UN-31-C-42基因启动子的克隆 | 第63-65页 |
| 3．1．3 启动子片段的序列测定与结构分析 | 第65-68页 |
| 3．1．4 Bp53启动子片段的功能鉴定 | 第68-69页 |
| 3．2 枯草杆菌WB600基因启动子的克隆 | 第69-76页 |
| 3．2．1 枯草杆菌WB600基因启动子的克隆 | 第69-70页 |
| 3．2．2 启动子片段的序列测定与结构分析 | 第70-72页 |
| 3．2．3 Bs2启动子片段的功能鉴定 | 第72-73页 |
| 3．2．4 SacB基因启动子、信号肽与P43启动子的克隆与序列分析 | 第73-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 4．1 利用启动子探针型载体的pSUPV4筛选基因启动子的策略 | 第76页 |
| 4．2 克隆到的启动子的特征 | 第76-77页 |
| 4．3 启动子片段Bp53的潜在用途 | 第77页 |
| 4．4 启动子片段Bs2在枯草杆菌WB600中的功能验证 | 第77-78页 |
| 5．参考文献 | 第78-81页 |
| 第三章 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)碱性蛋白酶基因表达质粒的构建 | 第81-104页 |
| 摘要 | 第82-83页 |
| 1．引言 | 第83-86页 |
| 2．材料与方法 | 第86-89页 |
| 2．1 实验材料 | 第86-87页 |
| 2．2 实验方法 | 第87-89页 |
| 3．结果 | 第89-96页 |
| 3．1 表达质粒的构建策略 | 第89-90页 |
| 3．2 Bp-AP融合基因的构建 | 第90-94页 |
| 3．2．1 Bp53片段的PCR扩增 | 第90-91页 |
| 3．2．2 脱毛蛋白酶基因编码区序列和终止子的PCR扩增 | 第91-92页 |
| 3．2．3 Bp-AP融合基因的构建 | 第92页 |
| 3．2．4 重组子pMD-BpAp的酶切分析 | 第92-93页 |
| 3．2．5 重组子pMD-BpAp的PCR验证 | 第93-94页 |
| 3．2．6 融合处的序列测定 | 第94页 |
| 3．3 表达载体pSU-BpAp的构建与鉴定 | 第94-96页 |
| 3．3．1 重组子pSU-BpAp的酶切分析 | 第95页 |
| 3．3．2 重组子pSU-BpAp的PCR验证 | 第95-96页 |
| 4．讨论 | 第96-101页 |
| 4．1 穿梭载体pSUGV4的特点 | 第96-97页 |
| 4．2 表达质粒pSU-BpAp的复制子 | 第97页 |
| 4．3 表达质粒pSU-BpAp中的启动子 | 第97-98页 |
| 4．4 表达质粒pSU-BpAp中的信号肽 | 第98-99页 |
| 4．5 表达质粒pSU-BpAp中的前肽序列 | 第99-100页 |
| 4．6 表达质粒pSU-BpAp中的终止子 | 第100-101页 |
| 5．参考文献 | 第101-104页 |
| 第四章 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)碱性蛋白酶基因在枯草杆菌中的表达 | 第104-129页 |
| 摘要 | 第105-106页 |
| 1．引言 | 第106-108页 |
| 2．材料与方法 | 第108-112页 |
| 2．1 实验材料 | 第108-110页 |
| 2．2 实验方法 | 第110-112页 |
| 3．结果 | 第112-119页 |
| 3．1 AP基因在枯草杆菌中的表达 | 第112-113页 |
| 3．1．1 牛奶平板检测蛋白酶基因的表达 | 第112-113页 |
| 3．1．2 转化子pSU-BpAp／WB600发酵上清液的SDS-PAGE分析 | 第113页 |
| 3．2 转化子pSU-BpAp／WB600碱性蛋白酶的产生 | 第113-114页 |
| 3．3 pSU-BpAp／WB600发酵上清液的脱毛实验 | 第114-116页 |
| 3．3．1 发酵上清液不同处理时间的脱毛效果 | 第114-115页 |
| 3．3．2 不同菌株发酵液的脱毛效果比较 | 第115-116页 |
| 3．4 转化子pSU-BpAp／WB600发酵条件的研究 | 第116-119页 |
| 3．4．1 最佳碳源的选择 | 第116-117页 |
| 3．4．2 最佳氮源的选择 | 第117-118页 |
| 3．4．3 最佳培养温度的选择 | 第118页 |
| 3．4．4 最佳装液量的选择 | 第118页 |
| 3．4．5 确定的优化发酵条件 | 第118-119页 |
| 3．5 不同菌株在最佳产酶培养基中的产酶比较 | 第119页 |
| 4．讨论 | 第119-125页 |
| 4．1 短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的脱毛机理 | 第119-120页 |
| 4．2 转化子pSU-BpAp／WB600的碱性蛋白酶表达量低的可能原因 | 第120-121页 |
| 4．3 枯草杆菌分泌外源蛋白的能力 | 第121-122页 |
| 4．4 提高碱性脱毛蛋白酶基因表达的策略 | 第122页 |
| 4．5 影响外源基因表达的因素 | 第122-125页 |
| 5 参考文献 | 第125-129页 |
| 文献综述 | 第129-169页 |
| 1 芽孢杆菌表达系统的研究进展 | 第130-153页 |
| 摘要 | 第130-131页 |
| 1．1 芽孢杆菌的特点 | 第131页 |
| 1．2 芽孢杆菌表达系统的早期研究工作 | 第131-132页 |
| 1．3 芽孢杆菌宿主菌株 | 第132-134页 |
| 1．4 芽孢杆菌表达系统中的载体 | 第134-137页 |
| 1．5 芽孢杆菌的基因表达特点 | 第137-140页 |
| 1．6 芽孢杆菌己表达的基因 | 第140-143页 |
| 1．7 蛋白工程在芽孢杆菌表达系统中的应用 | 第143页 |
| 1．8 芽孢杆菌表达系统存在的问题及今后发展方向 | 第143-144页 |
| 1．9 展望 | 第144-145页 |
| 参考文献 | 第145-153页 |
| 2 外源基因高效表达的研究进展 | 第153-169页 |
| 摘要 | 第153-154页 |
| 2．1 表达载体 | 第154-159页 |
| 2．2 影响外源基因在宿主细胞中的高效表达的因素 | 第159-163页 |
| 2．3 培养条件对外源基因高效表达的影响 | 第163-166页 |
| 参考文献 | 第166-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 在读期间论文发表及获奖情况 | 第170-171页 |
