| 第一章 文献综述--转基因产品及其检测技术 | 第1-34页 |
| 1 全球转基因作物发展概况 | 第12-15页 |
| ·全球转基因作物种植面积 | 第13页 |
| ·转基因作物在发达国家和发展中国家的分布 | 第13-14页 |
| ·转基因作物的种类分布 | 第14页 |
| ·转基因作物的性状分布 | 第14页 |
| ·转基因作物的主要种类 | 第14-15页 |
| ·全球转基因大豆、玉米、棉花、油菜的种植情况 | 第15页 |
| 2 转基因作物的安全争论和转基因标签制度 | 第15-17页 |
| ·转基因作物的安全性问题 | 第15-16页 |
| ·转基因标签制度 | 第16-17页 |
| 3 转基因作物的检测技术 | 第17-34页 |
| ·转基因产品检测的取样及标准参照材料 | 第17-18页 |
| ·转基因产品的核酸检测技术 | 第18-28页 |
| ·核酸的分离和纯化 | 第18-20页 |
| ·Southern印迹 | 第20页 |
| ·定性PCR | 第20-23页 |
| ·PCR技术原理 | 第20-22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·定量PCR | 第23-28页 |
| ·PCR-ELISA | 第24页 |
| ·竞争性定量PCR(QC-PCR) | 第24-26页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第26-28页 |
| ·转基因产品的蛋白检测技术 | 第28-32页 |
| ·蛋白的提取 | 第28-29页 |
| ·蛋白质印迹 | 第29页 |
| ·酶联免疫分析法 | 第29-30页 |
| ·酶联免疫分析法的基本原理 | 第29-30页 |
| ·酶联免疫分析法的种类 | 第30页 |
| ·酶联免疫分析法在转基因检测中的应用 | 第30页 |
| ·试纸条检测 | 第30-32页 |
| ·检测原理 | 第30-31页 |
| ·对转基因农作物的定量 | 第31-32页 |
| ·其它免疫分析方法 | 第32页 |
| ·其它方法 | 第32-34页 |
| 第二章 转基因大豆及其加工产品的PCR检测 | 第34-56页 |
| 1 引言 | 第34-35页 |
| 2 实验材料与方法 | 第35-41页 |
| ·材料，试剂与仪器 | 第35-36页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·转基因大豆外源基因(CP4-EPSPS)和内标准基因序列的获得 | 第35页 |
| ·酶与试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·大豆天然种子及其加工产品DNA的基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| ·DNA质量测定及浓度定量 | 第37页 |
| ·引物和探针的设计 | 第37-38页 |
| ·定性、复合及定量PCR引物的设计 | 第37-38页 |
| ·定量探针的设计 | 第38页 |
| ·定性、复合及定量PCR反应体系和反应条件的建立 | 第38-40页 |
| ·定性、复合PCR反应体系和反应条件 | 第38-39页 |
| ·定量PCR反应体系与反应条件 | 第39-40页 |
| ·定性PCR检测体系的初步建立 | 第40页 |
| ·内标准基因和外源基因定性(复合)PCR检测灵敏度分析 | 第40页 |
| ·转基因大豆及其加工产品的定性及复合PCR检测 | 第40页 |
| ·转基因大豆的定量PCR检测 | 第40-41页 |
| ·转基因抗草甘膦大豆内标准基因和外源基因定量PCR检测的标准曲线 | 第40-41页 |
| ·转基因大豆产品定量长、短片断PCR产物检测 | 第41页 |
| 3 实验结果与分析 | 第41-56页 |
| ·转基因抗草甘膦大豆外源基因和内标准基因序列与PCR引物 | 第41-46页 |
| ·转基因抗草甘膦大豆的质粒图谱 | 第41页 |
| ·转基因抗草甘膦大豆的基因序列 | 第41-45页 |
| ·转基因抗草甘膦大豆定性及定量PCR引物 | 第45-46页 |
| ·转基因大豆及其加工产品的DNA抽提得率 | 第46-47页 |
| ·转基因大豆及其加工产品得定性及复合PCR检测 | 第47-50页 |
| ·定性PCR检测体系的初步建立 | 第47页 |
| ·转基因抗草甘膦大豆内标准基因和外源基因检测灵敏度 | 第47-48页 |
| ·转基因大豆及其加工产品内标准基因和外源基因定性PCR检测 | 第48-49页 |
| ·转基因大豆及其加工产品内标准基因和外源基因复合PCR检测 | 第49-50页 |
| ·转基因大豆及其加工产品定量PCR检测体系建立 | 第50-54页 |
| ·转基因抗草甘膦大豆内标准基因和外源基因定量检测标准曲线 | 第50-52页 |
| ·定量检测的优化体系 | 第51页 |
| ·定量检测的标准曲线 | 第51-52页 |
| ·转基因大豆检测的精确定量PCR | 第52-54页 |
| ·精确定量的引物和探针 | 第53页 |
| ·精确定量的标准曲线 | 第53-54页 |
| ·总结和讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 转基因大豆Cp4-EPSPS基因的克隆、表达、多克隆及单克隆抗体制备 | 第56-89页 |
| 1 引言 | 第56-61页 |
| ·转基因农产品的蛋白水平检测 | 第56页 |
| ·酶联免疫分析技术和杂交瘤技术 | 第56-61页 |
| ·酶联免疫吸附技术 | 第56页 |
| ·酶联免疫吸附法的特点 | 第56页 |
| ·酶联免疫吸附法的基本原理 | 第56页 |
| ·酶联免疫吸附法的种类 | 第56页 |
| ·杂交瘤技术 | 第56-61页 |
| ·杂交瘤技术的基本原理 | 第57-58页 |
| ·杂交瘤技术的基本流程 | 第58-59页 |
| ·杂交瘤技术在食品检测中的应用 | 第59-61页 |
| 2 实验材料与方法 | 第61-72页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·主要试剂配制 | 第61-64页 |
| ·抗原合成的有关试剂配制: | 第61页 |
| ·杂交瘤细胞株建立有关试剂配制: | 第61-63页 |
| ·单克隆抗体鉴定及初步应用有关试剂配制: | 第63-64页 |
| ·实验仪器: | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-72页 |
| ·CP4-EPSPS基因克隆、表达与蛋白抗原制备 | 第65-68页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第65-66页 |
| ·TBE-agarose电泳和DNA片段的回收(透析袋电洗脱法) | 第66页 |
| ·大肠杆菌菌株DH5α感受态的制备与转化 | 第66页 |
| ·DNA的限制性酶切反应和DNA片段连接反应 | 第66页 |
| ·转基因大豆基因组DNA的提取 | 第66页 |
| ·CP4-EPSPS基因表达载体的构建 | 第66-67页 |
| ·CP4-EPSPS基因在大肠杆菌中的表达及蛋白的纯化 | 第67-68页 |
| ·CP4-EPSPS基因表达蛋白多克隆抗体的制备及检测的初步应用 | 第68-69页 |
| ·新西兰大白兔免疫 | 第68页 |
| ·多克隆抗体血清制备、纯化及保存 | 第68页 |
| ·纯化抗体的ELISA法抗体滴度测定 | 第68页 |
| ·Western blot检测转基因大豆中的CP4-EPSPS基因 | 第68-69页 |
| ·CP4-EPSPS基因表达蛋白单克隆抗体的制备及检测的初步应用 | 第69-72页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第69-71页 |
| ·单克隆抗体的制备和纯化 | 第71页 |
| ·单克隆抗体交叉配对反应 | 第71-72页 |
| ·CP4-EPSPS基因表达蛋白单克隆抗体检测的初步应用 | 第72页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第72-89页 |
| ·抗原的合成及多克隆抗体的转基因大豆检测 | 第72-81页 |
| ·序列、质粒信息 | 第72-77页 |
| ·引物设计及CP4-EPSPS全长基因PCR扩增 | 第77-78页 |
| ·克隆到T载体中测序: | 第78-79页 |
| ·构建表达载体，诱导获得重组蛋白 | 第79-80页 |
| ·CP4-EPSPS蛋白大肠杆菌表达 | 第80页 |
| ·CP4-EPSPS大肠杆菌表达蛋白抗原性的检测 | 第80-81页 |
| ·多克隆抗体的滴度测定 | 第81页 |
| ·多克隆抗体对转基因抗草甘膦大豆的Western检测 | 第81页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第81-86页 |
| ·小鼠免疫 | 第81页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第81-82页 |
| ·腹水的纯化及酶标 | 第82-84页 |
| ·单抗的交叉配对测定 | 第84-86页 |
| ·检测技术的初步建立 | 第86-87页 |
| ·ELISA检测技术的初步建立 | 第86-87页 |
| ·检测技术的初步应用 | 第87页 |
| ·总结和讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-103页 |
