| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 缩略表 | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1 DNA 损伤修复与肿瘤治疗 | 第10-12页 |
| ·常见的抗癌药物及其作用机制 | 第10-11页 |
| ·NHEJ 和 HR 修复机制 | 第11-12页 |
| 2 Purα蛋白 | 第12-15页 |
| ·Purα蛋白的结构和功能 | 第12-14页 |
| ·Purα参与损伤修复功能的国内外研究 | 第14-15页 |
| 3 Ku70/80 结构和功能 | 第15-16页 |
| 4 主要研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 Purα蛋白与 Ku70/80 蛋白存在相互作用 | 第18-34页 |
| 1 实验材料 | 第18-22页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第18-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·生物材料 | 第20页 |
| ·分析软件 | 第20页 |
| ·主要溶液配制 | 第20-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-29页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第22-25页 |
| ·细胞培养 | 第22页 |
| ·pIERS 和 pIERS-FLAG-PURA 质粒大抽 | 第22-23页 |
| ·细胞转染 | 第23页 |
| ·免疫印迹（Western Blot） | 第23-24页 |
| ·免疫共沉淀 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第25-29页 |
| ·pGADT7 和 pGBKT7 酵母质粒构建 | 第25-28页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·TRIZOL 试剂提取 RNA | 第25页 |
| ·合成第一链 cDNA | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增 KU70 和 KU80 基因 | 第26页 |
| ·PCR 产物回收 | 第26页 |
| ·EcoR I 和 BamH I 双酶切 | 第26-27页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·制备感受态大肠杆菌 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·双酶切鉴定并测序 | 第28页 |
| ·醋酸锂介导的酵母转化方法 | 第28页 |
| ·酵母杂交和表型筛选 | 第28-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-32页 |
| ·高表达 Purα细胞株的筛选和鉴定 | 第29-30页 |
| ·利用免疫共沉淀技术验证 Purα与 Ku70/80 是否存在相互作用 | 第30-31页 |
| ·利用酵母双杂交实验验证 Purα与 Ku70/80 是否存在直接相互作用 | 第31-32页 |
| ·pGADT7-KU70/80 和 pGBKT7-KU70/80 载体的构建 | 第31-32页 |
| ·构建成功的 AD 或 BD 质粒用醋酸锂介导转化酵母 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 Purα蛋白联合 Ku70/80 蛋白参与 DNA 损伤修复功能的初探 | 第34-53页 |
| 1 实验材料 | 第34-36页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·生物材料 | 第35页 |
| ·分析软件 | 第35-36页 |
| ·主要溶液配制 | 第36页 |
| 2 实验方法 | 第36-38页 |
| ·免疫印迹（Western Blot） | 第36页 |
| ·MTT 实验 | 第36-37页 |
| ·MTT 实验检测 Purα高表达对 293T 细胞活力影响 | 第36-37页 |
| ·MTT 实验检测 Purα高表达对三种药物处理后 293T 细胞敏感性影响 | 第37页 |
| ·免疫共定位 | 第37-38页 |
| ·构建 Purα低表达细胞株 | 第38页 |
| ·包装病毒 | 第38页 |
| ·侵染并筛选干扰 Purα的 293T、Hela、MCF-7 和 U2OS 细胞系 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-50页 |
| ·Purα高表达对 293T 细胞活力影响 | 第38-39页 |
| ·Purα高表达对 DNA 损伤试剂处理后 293T 细胞敏感性影响 | 第39-41页 |
| ·细胞免疫化学实验 | 第41-47页 |
| ·三种损伤试剂处理后 293T 和 MCF-7 细胞形态变化 | 第41-42页 |
| ·三种损伤试剂处理后 Purα和 Ku70 蛋白在 293T 细胞内定位情况 | 第42-47页 |
| ·损伤试剂处理后细胞内 Purα蛋白和 Ku70/80 蛋白含量的变化 | 第47-49页 |
| ·细胞免疫化学实验 | 第47-48页 |
| ·Western blot 实验 | 第48-49页 |
| ·药物处理对高表达 Purα蛋白的 293T 细胞 Ku70/80 蛋白含量的影响 | 第48-49页 |
| ·阿霉素处理 293T 和 MCF-7 细胞不同时间对 Purα蛋白含量的影响 | 第49页 |
| ·Western blot 验证对 Purα蛋白的 RNA 干扰效果 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 结论与展望 | 第53-54页 |
| 1 结论 | 第53页 |
| 2 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 发表论文情况 | 第62页 |
