| 摘要 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 英文缩略语表 | 第8-12页 |
| 一、 前言 | 第12-20页 |
| 1．1 决定外源基因表达水平的几个因素 | 第12-14页 |
| 1．2 翻译起始区的定义及其自由能对翻译起始的重要意义 | 第14页 |
| 1．3 TIR区自由能及二级结构与G+C含量的关系 | 第14-15页 |
| 1．4 密码子偏好性对于翻译顺利进行的重要意义 | 第15-16页 |
| 1．5 纳豆激酶简介 | 第16-17页 |
| 1．6 表达质粒pET3c简介 | 第17-18页 |
| 1．7 实验的目的及思路 | 第18-20页 |
| 二、 实验设备及材料 | 第20-26页 |
| 2．1 主要仪器 | 第20页 |
| 2．2 实验材料 | 第20-21页 |
| 2．3 常用试剂 | 第21页 |
| 2．4 培养基 | 第21-22页 |
| 2．5 酶类 | 第22-23页 |
| 2．6 分子量参照物 | 第23页 |
| 2．7 试剂与母液配制 | 第23-26页 |
| 三、 实验方法 | 第26-43页 |
| 3．1 寻找TIR区应该突变的位点 | 第26-28页 |
| 3．1．1 纳豆激酶原的TIR区分析 | 第27-28页 |
| 3．1．2 纳豆激酶的TIR区分析 | 第28页 |
| 3．2 外源基因表达载体的构建 | 第28-35页 |
| 3．2．1 纳豆激酶原的表达载体的构建 | 第28-32页 |
| 3．2．2 纳豆激酶的表达载体的构建 | 第32-35页 |
| 3．3 蛋白表达的检测 | 第35-36页 |
| 3．3．1 纳豆激酶原的蛋白表达检测 | 第35-36页 |
| 3．3．2 纳豆激酶的蛋白表达检测 | 第36页 |
| 3．4 目标蛋白的包涵体复性 | 第36-38页 |
| 3．4．1 目标蛋白是否为分泌型表达的鉴定 | 第36页 |
| 3．4．2 目标蛋白破碎后存在状态的鉴定 | 第36页 |
| 3．4．3 包涵体分离的第一步 | 第36-37页 |
| 3．4．4 包涵体分离的第二步 | 第37页 |
| 3．4．5 包涵体的溶解 | 第37页 |
| 3．4．6 包涵体的复性 | 第37页 |
| 3．4．7 复性的蛋白的浓缩 | 第37-38页 |
| 3．5 蛋白的纤溶活性检测 | 第38页 |
| 3．6 目标蛋白的过柱纯化 | 第38-39页 |
| 3．7 突变序列的分析 | 第39页 |
| 3．8 本实验常用方法汇总 | 第39-43页 |
| 四、 实验结果 | 第43-61页 |
| 4．1 TIR区分析结果 | 第43-44页 |
| 4．1．1 纳豆激酶原的TIR区自由能分析结果 | 第43页 |
| 4．1．2 纳豆激酶的TIR区自由能分析结果 | 第43-44页 |
| 4．2 引物设计结果 | 第44-45页 |
| 4．3 突变序列一系列克隆的获得 | 第45-49页 |
| 4．3．1 纳豆激酶原突变系列构建结果 | 第45-47页 |
| 4．3．2 纳豆激酶突变系列构建结果 | 第47-49页 |
| 4．4 蛋白产物的包涵体复性 | 第49-54页 |
| 4．4．1 纳豆激酶原的包涵体复性过程结果 | 第49-52页 |
| 4．4．2 纳豆激酶的包涵体复性过程结果 | 第52-54页 |
| 4．5 蛋白的纤溶活性检测 | 第54-55页 |
| 4．6 目标蛋白的纯化结果 | 第55-57页 |
| 4．7 重组质粒序列分析结果 | 第57-61页 |
| 五、 讨论 | 第61-67页 |
| 5．1 现阶段计算机软件所能起到的作用和前景 | 第61-62页 |
| 5．2 DNASIS 2．5预测二级结构的准确性 | 第62-64页 |
| 5．3 纳豆激酶原中的信号肽和原肽对其分泌性质的影响 | 第64-67页 |
| 六、 实验结论及展望 | 第67-68页 |
| 七、 参考文献 | 第68-75页 |
| 在学期间论文及科研成果清单 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
