| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1 木质素生物合成及其调控的研究进展 | 第12-21页 |
| ·木质素的种类和分布 | 第12-13页 |
| ·木质素的结构特征及特性 | 第13-14页 |
| ·木质素生物合成途径及其重要酶 | 第14-18页 |
| ·木质素单体合成途径的多样性 | 第18页 |
| ·木质素生物合成的基因调控 | 第18-21页 |
| 2 RNA干扰研究进展 | 第21-24页 |
| ·RNA干扰的分子机制 | 第21-22页 |
| ·RNAi的特点 | 第22页 |
| ·干扰RNA技术在植物基因工程中的应用 | 第22-24页 |
| 3 问题与展望 | 第24页 |
| 4 本研究的课题来源、研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 苎麻CCOAOMT基因干扰表达载体的构建及其转化农杆菌 | 第25-42页 |
| 1 材料与试剂 | 第25-26页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-35页 |
| ·引物设计及干扰正向和反向目标序列片段的扩增 | 第26-29页 |
| ·正、反目标序列BnCCoAOMT的TA克隆、鉴定及其命名 | 第29-32页 |
| ·植物干扰表达载体pFGTC5941-BnCCoAOMTi的构建及检测 | 第32-34页 |
| ·干扰表达载体pFGC5941-BnCCoAOMTi转化根癌农杆菌LBA4404 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·干扰植物表达载体pFGC5941-BnCCoAOMTi的构建流程 | 第35-36页 |
| ·正、反目的片段的TA克隆 | 第36-37页 |
| ·植物干扰表达载体pFGC5941-rBnCCoAOMT的构建 | 第37-38页 |
| ·干扰植物表达载体pFGC5941-BnCCoAOMTi最终构建 | 第38-40页 |
| ·干扰表达载体pFGC5941-BnCCoAOMTi转化根癌农杆菌LBA4404 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| ·RNAi干扰载体靶序列的选择 | 第40-42页 |
| 第三章 农杆菌介导苎麻CCOAOMT基因干扰表达载体转化烟草WS38 | 第42-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第42-43页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-48页 |
| ·农杆菌介导获得转基因植株的技术路线: | 第43-44页 |
| ·烟草试管无菌苗的扩繁: | 第44页 |
| ·草胺膦(PPT)选择剂浓度的确定 | 第44页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第44-45页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草表型观察 | 第46页 |
| ·转基因烟草Klason木质素及总纤维素含量的测定 | 第46-48页 |
| ·转基因烟草组织切片检测Wiesner反应 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-54页 |
| ·草胺膦(PPT)选择剂浓度的确定 | 第48页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第48-50页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第50-51页 |
| ·转基因烟草表型观察 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草Klason木质素及总纤维素含量的测定 | 第52-53页 |
| ·转基因烟草组织切片Wiesner反应检测 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| ·启动子的选择 | 第54-55页 |
| ·抑制CCoAOMT表达可以降低转基因植物的木质素含量 | 第55页 |
| ·关于干扰抑制苎麻CCoAOMT基因对烟草生长的影响 | 第55页 |
| ·关于Wiesner反应检测 | 第55-57页 |
| 第四章 BNCCOAOMT基因干扰载体改建及亚麻转化 | 第57-69页 |
| 1 材料与试剂 | 第57-58页 |
| ·植物材料 | 第57页 |
| ·菌株和载体 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57-58页 |
| 2 实验方法 | 第58-60页 |
| ·目的片段Hyg+35S的TA克隆、酶切检测及其测序 | 第58-59页 |
| ·干扰植物表达载体pFH-BnCCoAOMTi的重新构建及检测 | 第59页 |
| ·农杆菌介导的亚麻遗传转化体系优化 | 第59-60页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第60页 |
| ·转基因烟草表型观察 | 第60页 |
| ·转基因烟草组织切片检测Wiesner反应 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-67页 |
| ·干扰植物表达载体的构建流程 | 第60-61页 |
| ·目标序列的测序结果 | 第61页 |
| ·目的片段的TA克隆 | 第61-62页 |
| ·干扰植物表达载体pFH-BnCCoAOMTi目的片段的菌落PCR和双酶切检测 | 第62页 |
| ·干扰表达载体pFH-BnCCoAOMTi转化根癌农杆菌LBA4404 | 第62-63页 |
| ·亚麻胚轴Hyg选择压力的确定 | 第63页 |
| ·培养基的选择 | 第63-64页 |
| ·胚轴预培养对转化的影响 | 第64页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第64页 |
| ·农杆菌OD_(600)值和侵染时间对转化的影响 | 第64-65页 |
| ·转基因亚麻中目标序列的PCR检测 | 第65页 |
| ·转基因亚麻生芽、移栽和表型观察 | 第65-66页 |
| ·转基因烟草组织切片Wiesner反应检测 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| ·关于亚麻直接分化受体系统 | 第67-68页 |
| ·关于亚麻对选择抗生素的敏感性 | 第68页 |
| ·关于亚麻PCR检测 | 第68-69页 |
| 第五章 BNCCOAOMT干扰表达载体对苎麻的遗传转化 | 第69-76页 |
| 1 材料与试剂 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-71页 |
| ·苎麻外植体的接种及其培养条件 | 第69页 |
| ·苎麻再生体系的建立 | 第69-70页 |
| ·农杆菌介导的苎麻干扰载体遗传转化体系优化 | 第70页 |
| ·转基因苎麻愈伤组织的PCR检测 | 第70-71页 |
| 3 结果分析 | 第71-75页 |
| ·不同激素对湘苎二号叶片愈伤诱导的影响 | 第71页 |
| ·不同激素浓度对不同品种叶片不定芽诱导的影响 | 第71-73页 |
| ·不同激素浓度对再生植株生根及移栽的影响 | 第73页 |
| ·苎麻叶盘Hyg选择压力的确定 | 第73页 |
| ·延迟筛选对转化的影响 | 第73页 |
| ·农杆菌介导的苎麻干扰载体遗传转化体系优化 | 第73-74页 |
| ·转基因苎麻愈伤组织的观察和PCR检测 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-76页 |
| ·苎麻再生体系构建的异同 | 第75页 |
| ·苎麻转化再生的探讨 | 第75-76页 |
| 第六章 结论和展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 附录A:缩略词表 | 第84-85页 |
| 附录B:主要试剂配制 | 第85-87页 |
| 附录C:CAO+35S片段测序报告 | 第87-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 作者简介 | 第91页 |
