| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1. 引言 | 第9-18页 |
| ·农药与环境污染 | 第9页 |
| ·有机磷农药的使用现状及中毒机理 | 第9-10页 |
| ·微生物降解有机磷农药的研究进展 | 第10-17页 |
| ·降解有机磷农药的微生物种类及筛选 | 第10-12页 |
| ·微生物降解有机磷农药的降解机理与代谢途径 | 第12-13页 |
| ·影响农药降解的因素 | 第13-14页 |
| ·有机磷农药降解酶基因的克隆 | 第14-15页 |
| ·降解酶的特性研究及工程菌的构建 | 第15-17页 |
| ·本文研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·药品和试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| ·培养基与试剂配制 | 第19页 |
| ·常用缓冲液 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-28页 |
| ·菌株的富集培养及分离纯化 | 第20页 |
| ·形态观察和生理生化鉴定 | 第20页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| ·细菌16S rDNA的PCR扩增 | 第21页 |
| ·菌株HS-D36对甲基对硫磷的降解特性研究 | 第21-23页 |
| ·菌株HS-D36反硝化能力的测定 | 第23-24页 |
| ·DNA片段的连接转化 | 第24页 |
| ·细菌质粒的提取 | 第24页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第24-25页 |
| ·DNA片段的回收 | 第25页 |
| ·甲基对硫磷水解酶基因(mpd)的克隆 | 第25页 |
| ·原核细胞中重组质粒的筛选 | 第25-26页 |
| ·MPD蛋白的原核表达及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第26页 |
| ·重组甲基对硫磷水解酶MPD的初步研究 | 第26-28页 |
| 3. 实验结果 | 第28-43页 |
| ·甲基对硫磷菌株的分离和鉴定 | 第28页 |
| ·形态观察及生理生化鉴定 | 第28-30页 |
| ·降解菌形态观察 | 第28-29页 |
| ·降解菌的生理生化鉴定 | 第29-30页 |
| ·菌株的生长曲线的测定 | 第30页 |
| ·降解菌16S rDNA的鉴定 | 第30-32页 |
| ·降解菌基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·降解菌的16S rDNA的测序 | 第31-32页 |
| ·降解菌的系统进化分析 | 第32页 |
| ·菌株降解性能分析 | 第32-37页 |
| ·菌株HS-D36降解性能分析 | 第32-36页 |
| ·菌株HS-D36反硝化能力的研究 | 第36-37页 |
| ·甲基对硫磷水解酶基因mpd克隆表达 | 第37-41页 |
| ·PCR扩增甲基对硫磷水解酶基因mpd | 第37页 |
| ·重组质粒pMD-mpd的构建及鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组表达质粒pET-mpd的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| ·mpd基因在大肠杆菌BL21中的表达与鉴定 | 第40-41页 |
| ·粗酶液活性的初步分析 | 第41-43页 |
| ·对硝基苯酚标准曲线和蛋白质标准曲线的制作 | 第41页 |
| ·酶反应的最适温度、pH | 第41-42页 |
| ·金属离子对重组酶粗酶液的影响 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| ·野生型菌株与重组工程菌 | 第43页 |
| ·降解途径的分析 | 第43-44页 |
| ·降解基因的克隆表达 | 第44页 |
| ·后续工作设想 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 附录 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |