| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·种蛋开窗处理的研究进展 | 第12-15页 |
| ·开窗部位 | 第13-14页 |
| ·开窗方法 | 第14-15页 |
| ·将干扰载体导入鸡胚的方法 | 第15-17页 |
| ·电穿孔转染法 | 第15-16页 |
| ·脂质体介导法 | 第16页 |
| ·病毒载体法 | 第16-17页 |
| ·干扰效果的检测 | 第17-18页 |
| ·用于验证干扰效果的基因的研究进展 | 第18-20页 |
| ·DMRT1基因 | 第18-19页 |
| ·芳香化酶基因(Cytochrome P450 19A1,CYP19A1) | 第19页 |
| ·抗中肾旁管激素(Anti-Mullerian Hormone,AMH) | 第19-20页 |
| 2 研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 3 鸡胚中RNAI方法的建立 | 第21-35页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·主要试剂及配制 | 第21-23页 |
| ·主要仪器与设备 | 第23页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第23页 |
| ·主要数据库 | 第23-24页 |
| ·主要研究方法 | 第24-27页 |
| ·空载干扰质粒的小量提取(碱裂解法) | 第24页 |
| ·空载干扰质粒的大量制备 | 第24-25页 |
| ·种蛋的孵化 | 第25页 |
| ·种蛋的开窗处理及分组 | 第25-26页 |
| ·将空载干扰质粒载体转染鸡胚 | 第26-27页 |
| ·封口 | 第27页 |
| ·检测 | 第27页 |
| ·统计分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·种蛋的不同开窗方法效果比较 | 第27-28页 |
| ·空载干扰质粒载体转染鸡胚 | 第28-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·赤道面开窗方法的研究 | 第32页 |
| ·不同开窗处理方法对鸡胚的影响 | 第32-33页 |
| ·开窗导致种蛋孵化率下降原因分析 | 第33-34页 |
| ·鸡胚转染 | 第34页 |
| ·检测 | 第34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 4 利用DMRT1基因检测RNAI方法在鸡胚中的干扰效果 | 第35-53页 |
| ·试验材料 | 第35页 |
| ·主要试剂及配制 | 第35页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第35页 |
| ·试验方法 | 第35-42页 |
| ·干扰载体的构建 | 第35-37页 |
| ·干扰载体转染鸡胚 | 第37页 |
| ·活体成像系统下检测鸡胚的转染情况 | 第37页 |
| ·鸡胚的性别鉴定 | 第37-39页 |
| ·鸡胚总RNA的提取 | 第39-41页 |
| ·Real-time定量PCR分析基因表达 | 第41-42页 |
| ·统计分析 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-47页 |
| ·干扰载体的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| ·双重PCR鉴定鸡的性别 | 第43-44页 |
| ·总RNA的提取及质量检测 | 第44页 |
| ·cDNA质量的检测 | 第44-45页 |
| ·基因引物质量的检测 | 第45页 |
| ·荧光定量RT-PCR结果 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-52页 |
| ·shRNA的设计及重组质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·基因组DNA质量对性别鉴定的影响 | 第49页 |
| ·鸡胚RNA样的保存及RNA的提取、检测 | 第49-51页 |
| ·样本的采集 | 第51-52页 |
| ·雄性鸡胚中DMRT1和AMH基因的表达关系 | 第52页 |
| ·雌性鸡胚中DMRT1和CYP19A1基因的表达关系 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| ·本研究的主要结果 | 第53页 |
| ·本研究的不足和进一步研究的内容 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
