| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 目录 | 第12-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-50页 |
| ·普那霉素的研究进展 | 第17-29页 |
| ·普那霉素的化学结构 | 第17-18页 |
| ·普那霉素的理化性质 | 第18-19页 |
| ·普那霉素的作用机制 | 第19-20页 |
| ·普那霉素的抗菌活性 | 第20-23页 |
| ·普那霉素的临床应用 | 第23页 |
| ·普那霉素合成的相关基因概述 | 第23-29页 |
| (1) 普那霉素Ⅰ的生物合成 | 第23-26页 |
| (2) 普那霉素Ⅱ的生物合成机理 | 第26页 |
| (3) 普那霉素生物合成的调控基因 | 第26-27页 |
| (4) 普那霉素的抗性基因 | 第27-28页 |
| (5) 普那霉素的生物合成基因和抗性基因的分布 | 第28-29页 |
| ·基因组重排技术 | 第29-34页 |
| ·基因组重排技术的产生 | 第29-30页 |
| ·基因组重排技术的原理 | 第30页 |
| ·基因组重排的方法 | 第30-31页 |
| ·基因组重排的特点 | 第31页 |
| ·基因组重排技术在工业微生物育种中的应用 | 第31-34页 |
| ① 提高微生物合成初级代谢产物的能力: | 第31-32页 |
| ② 提高微生物合成次级代谢产物的能力: | 第32-34页 |
| ③ 提高微生物降解污染物的能力 | 第34页 |
| ·AFLP技术的简介 | 第34-38页 |
| ·AFLP技术的产生 | 第35页 |
| ·AFLP技术的原理 | 第35-36页 |
| ·AFLP的技术流程 | 第36页 |
| ·AFLP的优点 | 第36-37页 |
| ·AFLP技术的不足 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR技术的简介 | 第38-44页 |
| ·RT-PCR的产生 | 第38页 |
| ·RT-PCR的原理 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR实验的关键步骤 | 第39-43页 |
| ① mRNA的提取 | 第39-40页 |
| ② 提取的mRNA的质量检测 | 第40-42页 |
| ③ RT-PCR反应 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR在基因表达方面的应用 | 第43-44页 |
| ·蛋白质组学简介 | 第44-48页 |
| ·蛋白质组学的产生 | 第44-45页 |
| ·蛋白质组和蛋白质组学的概念 | 第45页 |
| ·蛋白质组学研究途径 | 第45-47页 |
| ·蛋白质组学研究的不足与展望 | 第47-48页 |
| ·本论文的研究思路和目标 | 第48-50页 |
| 第二章 普那霉素高产菌株的选育 | 第50-76页 |
| ·引言 | 第50-51页 |
| ·材料与方法 | 第51-62页 |
| ·材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·培养基及培养条件 | 第52-53页 |
| ·溶液配制 | 第53-54页 |
| ·主要设备和仪器 | 第54页 |
| ·孢子悬液的制备 | 第54-55页 |
| ·紫外诱变和出发菌株的选择 | 第55页 |
| ·菌丝体的培养和收集 | 第55-56页 |
| ·原生质体制备 | 第56页 |
| ·原生质体融合 | 第56-57页 |
| ·基因组重排 | 第57页 |
| ·还原糖和总糖测定 | 第57-59页 |
| ·氨基氮测定 | 第59页 |
| ·菌体干重测定 | 第59-60页 |
| ·普那霉素测定 | 第60-61页 |
| ·遗传稳定性实验 | 第61页 |
| ·发酵罐实验 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-74页 |
| ·紫外诱变时间的确定 | 第62页 |
| ·出发菌株的选择 | 第62-63页 |
| ·原生质体的制备及再生 | 第63-68页 |
| ·甘氨酸浓度对原生质体制备与再生的影响 | 第64-65页 |
| ·溶菌酶浓度对原生质体制备与再生的影响 | 第65-66页 |
| ·酶解时间对原生质体制备与再生的影响 | 第66-67页 |
| ·酶解温度对原生质体制备与再生的影响 | 第67-68页 |
| ·始旋链霉菌原生质体对自身产物耐受性的提高 | 第68-69页 |
| ·普那霉素产量的提高 | 第69-71页 |
| ·突变株的遗传稳定性试验 | 第71-72页 |
| ·高产菌株和原始菌株菌落形态的比较 | 第72-73页 |
| ·高产菌株与原始菌株在5L发酵罐中培养时生化特性的比较 | 第73-74页 |
| ·本章小结 | 第74-76页 |
| 第三章 基因组改组菌株发酵条件的研究 | 第76-94页 |
| ·引言 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-81页 |
| ·实验材料 | 第76-78页 |
| ·菌株 | 第76-77页 |
| ·初始发酵培养基: | 第77页 |
| ·主要试剂: | 第77-78页 |
| ·主要设备 | 第78-79页 |
| ·主要溶液 | 第79-80页 |
| ·中性甲醛溶液(18%) | 第79页 |
| ·酚酞溶液(1%) | 第79页 |
| ·甲基红溶液(0.1%) | 第79-80页 |
| ·结晶紫染液 | 第80页 |
| ·DNS试剂 | 第80页 |
| ·还原糖和总糖测定 | 第80页 |
| ·氨基氮测定 | 第80页 |
| ·菌体干重测定 | 第80页 |
| ·普那霉素测定 | 第80页 |
| ·5L发酵罐发酵实验 | 第80-81页 |
| ·结果和讨论 | 第81-93页 |
| ·培养基成分的优化 | 第81-85页 |
| ·碳源对产物合成的影响 | 第81-83页 |
| ·氮源对产物合成的影响 | 第83-85页 |
| ·培养条件的优化 | 第85-88页 |
| ·种龄对产量的影响 | 第85页 |
| ·接种量对产量的影响 | 第85-86页 |
| ·发酵初始pH对产量的影响 | 第86-87页 |
| ·发酵温度的产量的影响 | 第87-88页 |
| ·发酵过程曲线 | 第88-92页 |
| ·发酵罐上优化效果的比较 | 第92-93页 |
| ·本章小结 | 第93-94页 |
| 第四章 始旋链霉菌基因组的多态性研究 | 第94-109页 |
| ·引言 | 第94页 |
| ·材料与方法 | 第94-103页 |
| ·菌株 | 第94-95页 |
| ·主要试剂: | 第95-96页 |
| ·主要设备 | 第96-97页 |
| ·培养基 | 第97页 |
| ·缓冲液 | 第97-98页 |
| ·培养方法 | 第98页 |
| ·基因组DNA的提取和纯化 | 第98-99页 |
| ·基因组DNA的检测 | 第99页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第99页 |
| ·酶切产物和接头的连接 | 第99-100页 |
| ·预扩增反应 | 第100-101页 |
| ·选择性扩增反应 | 第101页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶和银染显色 | 第101-103页 |
| ·结果和讨论 | 第103-107页 |
| ·DNA提取和双酶切效果检验 | 第103页 |
| ·预扩增 | 第103-104页 |
| ·选择性扩增 | 第104-107页 |
| ·本章小结 | 第107-109页 |
| 第五章 与普那霉素合成相关的基因的表达丰度研究 | 第109-124页 |
| ·引言 | 第109-110页 |
| ·材料与方法 | 第110-116页 |
| ·实验菌株和培养方法 | 第110页 |
| ·主要试剂 | 第110-111页 |
| ·主要设备 | 第111页 |
| ·链霉菌菌株的培养 | 第111-112页 |
| ·链霉菌总RNA的提取 | 第112页 |
| ·粗提RNA样品的纯化 | 第112-113页 |
| ·总RNA的检测 | 第113-114页 |
| ·反转录反应(RT反应) | 第114-115页 |
| ·PCR扩增产物电泳分析 | 第115-116页 |
| ·结果和分析 | 第116-121页 |
| ·总RNA粗提样品电泳分析 | 第116页 |
| ·纯化后RNA样品电泳分析 | 第116-117页 |
| ·RNA浓度的测定及分析 | 第117页 |
| ·高产菌株和原始菌株的不同发酵时间的基因表达丰度变化 | 第117-121页 |
| ·核糖体RNA(rRNA)基因表达丰度分析 | 第119页 |
| ·ptr抗性基因表达丰度分析 | 第119-120页 |
| ·spbR调控基因表达丰度分析 | 第120页 |
| ·结构基因表达丰度分析 | 第120-121页 |
| ·讨论 | 第121-122页 |
| ·本章小结 | 第122-124页 |
| 第六章 始旋链霉菌蛋白质组学的初步研究 | 第124-150页 |
| ·引言 | 第124页 |
| ·实验材料 | 第124-128页 |
| ·菌株 | 第124-125页 |
| ·培养基 | 第125页 |
| ·主要材料与溶剂 | 第125-126页 |
| ·溶液配制 | 第126-128页 |
| ·主要设备和仪器 | 第128页 |
| ·实验方法 | 第128-141页 |
| ·培养方法 | 第128页 |
| ·细胞裂解方法 | 第128-130页 |
| ·蛋白质含量测定(Bradford法) | 第130-132页 |
| ·单向聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第132-135页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第135-141页 |
| ·结果与讨论 | 第141-147页 |
| ·蛋白质浓度标准曲线 | 第141-142页 |
| ·细胞破碎方法的比较 | 第142-143页 |
| ·裂解液的选择 | 第143-144页 |
| ·原始菌株和高产菌株细胞内总蛋白质浓度的比较 | 第144-145页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第145-146页 |
| ·出发菌株与诱变高产菌株的双向电泳图谱分析 | 第146-147页 |
| ·讨论 | 第147-148页 |
| ·本章小结 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-162页 |
| 作者简历 | 第162页 |